Producción Fotoquímica de H2O2 por pterinas en solución acuosa

MARIANA VIGNONI; M. LAURA DÁNTOLA; CAROLINA LORENTE; ROSA ERRA-BALSELLS; FRANCO M. CABRERIZO; ANDRÉS H. THOMAS

La Plata

Congreso; Sexto Encuentro Nacional de Investigadores en Temas Relacionados con Sustancias Peroxídicas (6º ENISP); 2010

INIFTA y Facultad de Ciencias Exactas, UNLP

IntroducciónLas pterinas son compuestos heterocíclicos que se encuentran distribuidos en la naturaleza.Por ejemplo, la biopterina (Bip), se acumula en las manchas blancas de pacientes quesufren vitiligo, enfermedad que cursa con depigmentación de la piel.1 La neopterina (Nep)es sintetizada por macrófagos activados.2Poseen un equilibrio ácido-base, y pueden existir en distintos estados de oxidación. Bajoirradiación UV-A (320-400 nm), las pterinas pueden fluorescer, generar especies reactivasde oxígeno (EROs), sufrir oxidación y generar fotoproductos.3ObjetivosEstudiar la formación de H2O2 a partir de la reacción de oxidación de distintas pterinas alser irradiadas con luz UV-A. Investigar el mecanismo de reacción.Parte ExperimentalCompuestos. Las pterinas fueron obtenidas de Schircks Laboratories (Switzerland), yfueron utilizadas sin purificación posterior. El pH de las soluciones se ajustó agregandomicrogotas de HCl o NaOH. El D2O (Sigma, 99.9%) fue utilizada como solvente y el pH seajustó con DCl (Aldrich, 99.5% D) y NaOD (CEA) en D2O.Irradiación UV. Los experimentos de irradiación continua se realizaron en celdas de cuarzo(1 cm de camino óptico) o en tubos para RMN, a temperatura ambiente. Las irradiacionesse realizaron con lámparas Rayonet RPR de emisión a 350 nm (Southern N.E. UltravioletCo.). Se irradiaron soluciones en ausencia de oxígeno, burbujeando con argón durante 10minutos.Análisis espectrofotométrico. Los espectros UV-visible se registraron con unespectrofotómetro Hewlett Packard 8452A. Las medidas se realizaron en celdas de cuarzo 1cm de camino óptico. Los espectros fueron obtenidos a distintos intervalos de tiempodurante la irradiación.Resonancia Magnética Nuclear. Los experimentos fueron realizados en un espectrómetroBruker AM-500. Se utilizó D2O como solvente.Determinación de H2O2. Para la determinación de H2O2, se utilizó el kit de Cholesterol deWiener. El H2O2 se cuantifica por el color que produce (absorbancia a 505 nm) alreaccionar con 4-aminofenazona y fenol.4ResultadosSe irradiaron distintas soluciones de Bip, Nep, 6-hidroximetilpterina (Hmp) y 6-formil-7,8-dihidropterina (H2Fop) de concentración entre 100-150 μM a pH 5.0 y 10.5 en ausencia deaire. En todos los casos, se registró la formación de un compuesto con una banda deabsorción centrada en 480 nm. Al airear la solución, se observó una reacción térmica, en lacual desaparece la banda de absorción mencionada y se detecta la presencia de H2O2indicando que en la fotooxidación de estas pterinas se genera esta especie reactiva deoxígeno.Para determinar la estructura de este intermediario, se realizaron experimentos de RMN,donde se utilizaron soluciones de concentración 2 mM y se obtuvieron espectros de 1HRMN,antes y después de irradiar. Se observó la aparición de dos picos a δ = 8.42 y δ =6.58 ppm.5ConclusionesCon estos resultados puede proponerse un mecanismo de reacción: