Estudio de la formación de fotoaductos fluorescentes entre Fotosensibilizadores endógenos y proteínas

REID, LARA O.; DANTOLA, MARIA LAURA; MARIN, MARIA LUISA; LHIAUBET-VALLET,VIRGINIE; THOMAS, ANDRÉS H.

Bariloche

Congreso; IV Reunión de Fotobiólogos Moleculares Argentinos; 2018

Grupo de Fotobiólogos Moleculares Argentinos, Universidad Nacional del Comahue

La mayor parte de laradiación solar que alcanza la superficie terrestre pertenece al rango UV-A delespectro (320 ? 400 nm). Este tipo de radiación no es absorbida por lasmacromoléculas biológicas (ADN y proteínas), por lo que normalmente no generafotolesiones de forma directa. Sin embargo, la radiación UV-A puede producirdaños de forma indirecta a través de reacciones fotosensibilizadas, siendoreconocida como un carcinógeno de clase I.1 Las pterinas son una familia de compuestos heterocíclicosque están ampliamente distribuidos en la naturaleza, participando en numerosasfunciones biológicas. Bajo excitación UV-A, las pterinas pueden fluorescer,experimentar fotooxidación y actuar como fotosensibilizadores.2 Recientemente se hareportado que bajo radiación UV-A, la pterina (Ptr), derivado aromático nosustituido, es capaz de formar un fotoaducto fluorescente con el nucleósidopirimidínico 2?desoxitimidina (dT).3 Los procesos de fotoalergia se atribuyen a la conjugacióncovalente de proteínas con agentes fotosensibilizantes. De esta manera, lasproteínas modificadas actúan como antígenos e inducen la respuesta del sistemainmunitario. Con el fin de profundizar en el conocimiento de estos procesos, elobjetivo principal de este trabajo es estudiar si la Ptr es capaz de generarfotoaductos con proteínas, para establecer el potencial fotoalérgico de estasmoléculas.Materialesy MétodosPara llevar a cabo el estudio, se irradiaron (λex=350 nm) soluciones acuosas de Ubiquitina (Ub) y Ptr a pH5.5 a temperatura ambiente. Se eligió como sustrato a la Ub, debido a que esuna proteína pequeña de 8.5 kDa, que posee un único residuo de tirosina (Tyr) yninguno de triptófano. La reacción fotoquímica fue estudiada porespectrofotometría UV-Vis, HPLC, fluorescencia y electroforesis en gel depoliacrilamida en condiciones desnaturalizantes (SDS-PAGE)Resultadosy conclusiones Bajo radiación UV-A la Ptr es capaz de formar un aducto con laUb, la formación del mismo es más eficiente en ausencia de O2. El estudio espectroscópicodel aducto revela que los espectros de emisión y excitación coinciden con losde la Ptr, al igual que el tiempo de vida de fluorescencia. Por otra parte,como consecuencia del proceso fotosensibilizado, la proteína sufreoligomerización mediada por dímeros de Tyr y una fragmentación, dependiente dela atmósfera.Referencias 1-El Ghissassi F., Baan R., Straif K., Lancet Oncol, 10, 51, 20092-Lorente C., Thomas, A.H., Acc. Chem. Res., 39, 395, 20063-Estébanez S.,Thomas A.H., Lorente C., ChemPhysChem, 19, 300, 2018