PERSONAL DE APOYO
PRIETO Eduardo Daniel
congresos y reuniones científicas
Título:
Configuración de apolipoproteína A-I en complejos lipoproteícos discoidales: su importancia para la remoción de colesterol celular
Autor/es:
CUELLAR, LUZ ANGELA; EDUARDO D. PRIETO; CABALEIRO, LAURA VIRGINIA; GARDA H.A
Reunión:
Jornada; Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2008
Resumen:
Las lipoproteínas discoidales de alta densidad (dHDL) son intermediarios
claves en el eflujo lipídico celular mediado por apolipoproteína A-I
(apoAI). Las mismas son secretados por el hígado o se originan por la
interacción de apoAI con células. Por la dificultad de su aislamiento,
la mayoría del conocimiento proviene de estudios con dHDL
reconstituidas. El método más usado para ello es la diálisis con
detergentes (1), aunque también pueden obtenerse por la reacción
espontánea de apoAI con las vesículas fosfolipídicas en la temperatura
de transición de fase, un proceso que puede ser similar a la lipidación
in vivo de apoAI. as dHDL consisten de una bicapa lipídica discoidal
rodeada por dos moléculas anti-paralelas de apoAI con sus hélices
perpendiculares a las cadenas hidrocarbonadas de los lípidos. En dHDL
obtenidas por diálisis de colato se detectaron dos ordenamientos
co-existentes (2): Uno con las hélices 5 en yuxtaposición(LL5/5), y la
segunda con la hélice-5 de una molécula de apoAI yuxtapuesta con la
hélice 2 de la otra molécula (LL5/2). En el presente trabajo se usaron
tres mutantes de cisteína (K107C, K133C y K226C) marcadas
extrínsecamente con grupos fluorescentes. En discos preparados con ellas
mediante ambos protocolos, se estimaron las distancias intermoleculares
entre las posiciones marcadas por homo- y hetero-transferencia de
energía usando mediciones de intensidad, anisotropía y tiempo de vida de
fluorescencia. Los datos indican la coexistencia de ambas
configuraciones en dHDL generado por colato, pero sólo la configuración
LL5/2 estaríapresente en dHDL generadas espontáneamente. Como hemos
propuesto anteriormente, los pares de hélices centrales 3-4 formarían un
ramillete intermolecular que se inserta en membranas que es posible en
la configuración LL5/2, pero no en la 5/5.Referencias:1. Matz, C.E. and
A. Jonas, J Biol Chem,, Micellar complexes of human apolipoprotein A-I
with phosphatidylcholines and cholesterol prepared from cholate-lipid
dispersions.. 257(8): p.4535-40 (1982).2. Silva, R.A., et al.,
Biochemistry, A mass spectrometric determination of the conformation of
dimeric apolipoprotein A-I in discoidal high density lipoproteins.
44(24): p. 8600-7 (2005)Agradecimientos: CONICET, ANPCyT y UNLP