ESTUDIO CONFORMACIONAL DE APOA-I EN PARTÍCULAS FOSFOLIPÍDICAS DISCOIDALES PREPARADAS POR DIFERENTES TÉCNICAS

EDUARDO D. PRIETO; HORACIO A. GARDA

Bahia Blanca, Argentina

Jornada; III Jornada de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2005

INIBIBB

La interacción de apolipoproteína A-I (apoAI) con membranas celulares resulta en su lipidización y formación de lipoproteínas de alta densidad discoidales de migración electroforética pre-b. Estas pre-b HDL, que también son secretadas por el hígado, son transformadas en las a-HDL esféricas mayoritarias en circulación por acción de lecitin-colesterol aciltransferasa (LCAT), que eterifica al Col y forma un núcleo hidrofóbico de CE. La mayoría de los estudios estructurales de HDL discoidales han sido realizados en partículas reconstituídas (rHDL) ?in vitro? mediante la reacción espontánea de apoAI con fosfolípidos (como DMPC) en la temperatura de transición de fase, o por diálisis de micelas mixtas con un detergente como colato. Los diferentes modelos de HDL discoidales, aunque difieren en la organización de la proteína, coinciden en que una bicapa de fosfolípidos es rodeada en su borde por apoAI. No se ha estudiado, sin embargo, si los diferentes métodos de reconstitución resultan en una diferente organización de la proteína en el disco. En este trabajo, dos mutantes de apoAI con un único residuo triptofano en su región central (W@104 y W@108) fueron utilizadas para comparar la organización de la proteína en discos de DMPC de dos moléculas de apoAI/partícula obtenidos por la reacción espontánea a 24ºC o por diálisis con colato. Mediciones de intensidad y anisotropía a diferentes longitudes de onda de excitación se utilizaron para detectar y cuantificar homotransferencia de energía de resonancia entre los residuos triptofano de cada molécula de apoAI en el disco. De esta manera se obtuvieron evidencias de que la organización de la proteína en el disco depende del método de reconstitución.