Hidrolytic Profile and isolation of the Proteolytic Components of Latex from Araujia Angustifolia fruits

OBREGÓN, WALTER DAVID; CURCIARELLO, RENATA; CAFFINI, NESTOR; PRIOLO, NORA

ACTA FARM. BONAERENSE

Colegio de Farmacéuticos de la Pcia de Buenos Aires

Año: 2006 vol. 25 p. 206 - 212

0326-2383

“Perfil Hidrolítico y Aislamiento de los componentes proteolíticos presentes en el eLátex de Frutos de Araujia Angustifolia.“ Se estudiaron las hidrolasas presentes en el látex de Araujia angustifolia (Asclepiadaceae), enredadera que crece en Argentina. El extracto crudo (CE) obtenido por centrifugación diferencial a 8000 y 15000 rpm del látex de frutos de A. angustifolia, recogido en buffer cítrico-citrato 0.05 M (ph 4,5) con EDTA 5 mM, exhibió varias actividades enzimáticas: amidásica con L-piroglutamil-L-fenilalanil-L-Leucina-p-nitroanilida (PFLNA) como sustrato; proteolítica sobre caseína al 1% en Tris-HCl pH: 8,5; poligalacturonidasa usando ácido poligalacturónico al 1% en buffer acético-acetato pH 4,5; pectin-metil esterasa ensayada sobre pectina al 1% en buffer cítrico-fosfato pH 6,8, en presencia de CaCl2 0,02M y endosterolítica empleando los ésteres p-nitrofenilados de N-α-carbobenzoxi-L-aminoácidos en buffer Tris-HCl pH:8. dado que la actividad proteolítica fue la principal actividad hidrolítica observada, se determinaron las características proteolíticas del CE, que contiene proteasas de tipo cisteínico: pH óptimo alcalino, punto isoeléctrico (pI) superior a 8,0 y resultan inhibidas por reactivos bloqueantes de grupos tiónicos, tales como iodoacetato y E-64. El CE mostró notable estabilidad térmica. Se detectaron tres proteasas por IEF y zimograma y luego fueron purificadas por FPLC. Las masas moleculares de las mismas fueron del oreden de 23kDa (SDS-PAGE). Las mismas fueron denominadas araujiaína aI,aII y aIII.