Selectividad en Superficies de Oro Modificadas.

PALLAROLA DIEGO; DOMENIANNI LUIS; PRIANO GRACIELA; BATTAGLINI FERNANDO

Merlo

Congreso; III Congreso Argentino de Química Analítica; 2005

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

La detección de interacciones específicas entre moléculas de origen biológico como antígeno/anticuerpo o la hibridación de ADN juega un importante rol como herramienta de diagnóstico en áreas como la medicina o la biología molecular. El proceso de detección se realiza utilizando distintas técnicas de transducción, ya sea en forma directa como: espectroscopía de resonancia del plasmón superficial (SPR) o microbalanza de cuarzo (QCM); o en forma indirecta a través de la marcación con moléculas fluorescentes o enzimas (con posterior detección electroquímica, colorimétrica o luminiscente). En muchos de los casos anteriormente citados, oro resulta una superficie ideal para ser utilizado como plataforma para estos ensayos, pero un tema a tener en cuenta son las interacciones que existen entre esta superficie, sus derivados y el analito a determinar, denominadas comúnmente como procesos de adsorción no específica. En este trabajo se estudia la adsorción no específica de avidina marcada con peroxidasa sobre superficies de oro modificadas con cistamina (Au/Cys) y cistamina y CM-Dextrán (Au/Cys/CMDex) introduciendo grupos carboxilatos para su posterior modificación. Posteriormente, esta última plataforma se modifica con biotinahidracina (Au/Cys/CMDex/biot). Las superficies mencionadas anteriormente son tratadas con derivados de polietilenglicol (PEG). El monitoreo de estas interacciones se realizan por amperometría y por luminiscencia. En el primer caso, se utiliza el ciclo catalítico entre la peroxidasa, un complejo de osmio y peróxido de hidrógeno, mientras que en el ensayo luminiscente se utiliza peroxidasa, luminol y peróxido de hidrógeno. De nuestros estudios se observa que Au y Au/Cys son superficies que presentan una importante adsorción no específica para proteínas; Para Au/Cys/CMDex, la adsorción no específica disminuye, pero aun es importante si se compara con los resultados obtenidos para Au/Cys/CMDex/biot. La introducción de derivados de PEG produce importantes mejoras, reduciendo la adsorción no específica en más de un 50%. Se presentan resultados sobre la estequiometría CMDex/PEG y la mejor relación señal específica/no-específica.