Determinación por HPLC de la composición de amino ácidos libres de la miel

COMETTO, P.; RUBIO, M.; DI PAOLA, R., FAYE, P.; ALDAO, M.

Montevideo, URUGUAY

Simposio; IV Simposio y Exposición “Desafíos Analíticos para el Nuevo Milenio” LATU; 2001

Objetivo: Desarrollar una técnica para la determinación cuali-cuantitativa de aminoácidos libres en muestras de miel a los fines de su caracterización fitogeográfica. Materiales y métodos: Se diluyeron 10 g de miel hasta un volumen final de 25 mL con buffer fosfato 0.14M pH 2,12 agregados 2,375 mmoles de norleucina (estándar interno). La dilución pasó a través de una columna de Amberlite IR-120 donde los aminoácidos fueron retenidos, los mismos fueron eluidos con 25 mL de NH4OH 2M. Se llevó a sequedad 300 μL en un rotavapor y se derivatizó con 20 μL de una solución de fenilisotiocianato 0,84M en etanol-H2O-Trietilamina (7:1:1). El material derivatizado se llevó a sequedad y se disolvió en el solvente de corrida: Ácido acético/acetato de sodio 0,14M-Trietilmaina 0,01M mas 79mL/L de acetonitilo, y se inyectó en un cromatógrafo Konik 500. Se empleó una columna de fase reversa C18 y gradiente de polaridad entre el solvente de corrida y una mezcla acetonirilo-H2O (6:4). Los feniltiocarbamil derivados fueron detectados con un detector UV a 254 nm. Resultados: En los cromatogramas se obtuvo una resolución admisible para 15 aminoácidos. Los valores promedio de C.V. (n=3) fueron de 6,02% para una mezcla de estándares y de 9,05% para una muestra de miel. Conclusión: La técnica descrita permite obtener en la miel perfiles de aminoácidos reproducibles y por lo tanto comparables para muestras de orígenes geográficos diferentes.