beta-Hexosmainidasa de ovocitos de X. laevis: su caracterización bioquímica

MORALES ES Y ARRANZ SE

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XII Jornadas Anuales de la Sociedad Argentina de Biología; 2010

Sociedad Argentina de Biología

Se ha reportado en animales filogenéticamente distantes que la N-acetil-β-D-glucosaminidasa (beta-hexosaminidasa o Hex) participa tanto en la unión de gametos como en la prevención de la polispermia. Nosotros previamente demostramos que la Hex es la principal actividad glicosídica en ovocitos de X. laevis. Además, presentamos por primera vez su secuencia putativa. Ahora, nuestro objetivo fue caracterizar la Hex de ovocitos de X. laevis. En ensayos de actividad realizados en geles nativos con extractos de ovocitos dos bandas con actividad Hex fueron detectadas. Usando sustratos específicos nosotros determinamos que ambas Hex corresponden a isoformas A o S. La composición molecular de ambas proteínas fue determinada por Western blot. La isoforma de mayor movilidad electroforética en geles nativos estuvo compuesta por dos tipos de cadenas polipeptídicas de 59 y 49 kDa. Solo una cadena de 59 kDa se observó en la isoforma de menor movilidad electroforética. Mientras que los polipéptidos de 59 kDa estuvieron de acuerdo con el polipéptido traducido del ORF de X. laevis, la cadena de 49 kDa parece ser un derivado proteolítico del polipéptido de 59 kDa. Finalmente, por inmunohistoquímica, la Hex fue localizada en el córtex del hemisferio animal. Debido a que en anfibios este hemisferio se reportó como el sitio de entrada del espermatozoide y que en ovocitos de X. laevis la Hex ha sido ligada a la prevención de la polispermia, nuestros experimentos sugieren la existencia de una estratégica localización de la Hex que podría directamente impactar en la eficiencia de la prevención de la polispermia.