Expresión en sistemas procariotas de la NAc Glucosaminidasa de Xenopus laevis e inmunolocalización en ovocitos

MORALES ES, ARRANZ S, CABADA MO.

Huerta Grande

Congreso; Primera Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de la República Argentina; 2007

Sociedades de Biología de la República Argentina.

En la membrana del espermatozoide existen enzimas que recono-cerían a modo de lectinas residuos de azúcares específicos de la envoltura que rodea a los ovocitos; en anfibios denominada envol-tura vitelina (EV). Una vez activados, los ovocitos liberan por exo-citosis el contenido de sus gránulos corticales modificando la EV y previniendo la polispermia. En anfibios existe evidencia de que la NAc glucosaminidasa (NAc glc) estaría implicada tanto en el reco-nocimiento entre las gametas como en la prevención de la polis-permia. El objetivo del presente trabajo fue determinar la presen-cia y localización de la Nac glc en ovocitos. Para ello se identifica-ron in-silico EST´s que la codificaban. Su secuencia codificante se obtuvo gentilmente desde el Instituto Nacional de Biología Básica de Japón. Fue sub-clonada como fusión a GST, expresada en E. coli DH5 y purificada del extracto soluble mediante una resina de Glutation-Sepharose seguido de SDS-PAGE y electroelución. Pos-teriormente se realizó un protocolo de inmunización en conejos y los anticuerpos obtenidos se utilizaron para inmulocalizar la NAc glc en cortes de ovocitos. La enzima mostró en todas las muestras analizadas una localización específica diferencial en la región cor-tical del polo animal (n=3). Nuestros resultados sugieren que la NAc glucosaminidasa de ovocitos de X. laevis estaría localizada diferencialmente en el cortex animal; sitio por donde penetra el es-permatozoide.