Producción de la hormona de crecimiento de Pejerrey en cultivos bacterianos. Aplicaciones en piscicultura

SCIARA, ANDRÉS A.; SOMOZA, GUSTAVO M.; ARRANZ, SILVIA E.

Mar del Plata, Argentina

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas. Sociedad Argentina de Biología

El pejerrey bonaerense (Odontesthes bonariensis) es un pez autóctono cuya calidad de carne y mercados de venta lo hacen interesante para su explotación comercial. Si bien se ha trabajado en el cultivo del pejerrey, aún no se han obtenido tasas de crecimiento adecuadas para su cultivo intensivo. En numerosas especies de peces se ha demostrado que el suplemento de la alimentación con hormona de crecimiento (GH) incrementa la velocidad de crecimiento de los mismos. El objetivo del siguiente trabajo es producir GH de pejerrey recombinante (pjGHr) en sistemas bacterianos para su uso en acuicultura y generar ensayos in-vitro para la evaluación de su actividad. Para ello se obtuvo por técnica de RT-PCR la secuencia que codifica para la pjGH madura y se subclonó en un vector pET-24 transformando con el mismo una cepa de E.coli BL21 modificada para producción de proteínas recombinantes con alta eficiencia induciendo con lactosa. Mediante lisis celular en French Press y centrifugación se  obtuvo la proteína en cuerpos de inclusión (CI). Esta representa el 26% del peso seco de las células. El rendimiento alcanzado es de aprox. 0,5 g de pjGHr por litro de cultivo. Por SDS-PAGE y análisis densitométrico se determinó que los CI tenían un 78% de pureza, aumentando a un 83% luego del lavado. Con el propósito de tener herramientas para evaluar el nivel de GH en plasma (ELISA) se generaron anticuerpos contra pjGH (AcGH). Análisis de extractos en cortes de hipófisis por Western Blots sumado a inmunohistoquímicas en cortes de hipófisis muestran la especificidad de los AcGH. Se puso a punto una PCR semicuantitativa para evaluar la actividad biológica de la pjGH midiendo la expresión del factor de crecimiento IGF-I en cultivos primarios de hepatocitos de pejerrey. Logramos obtener la pjGHr con altos rendimientos y pureza sin métodos costosos de purificación. Se generaron además herramientas para la detección de la actividad de la pjGhr in vitro y su concentración plasmática.