Optimización de la solubilización y renaturalización de la hormona de crecimiento de pejerrey producida en Escherichia coli

SCIARA, ANDRÉS A.; SOMOZA, GUSTAVO M.; ARRANZ, SILVIA E.

Buenos Aires, Argentina

Congreso; Congreso Internacional BairesBiotec 2005; 2005

REDBIO Argentina y Grupo Biotecnología

El crecimiento corporal es un parámetro particularmente importante en la ecuación económica en piscicultura y está condicionado, en parte, por los niveles de hormona de crecimiento (GH). GHs de diversas especies de peces han sido producidas en organismos procariotas y han sido utilizadas con éxito en la promoción del crecimiento cuando se administraron por vía oral. Hasta el momento no se ha descrito la producción de GHs recombinantes en atheriniformes como el pejerrey (Odontesthes bonariensis), un pez autóctono de interés comercial. La suplementación de la dieta de estos peces con GH compensaría un factor limitante para su cría: su lento crecimiento. La expresión de dichas hormonas como proteínas recombinantes en E. coli genera la agregación de las mismas formando cuerpos de inclusión como resultado de la agregación de formas intermediarias de plegamiento y la falta de formación de puentes disulfuro característicos de estas hormonas en el entorno reductor bacteriano. Por lo tanto las etapas de solubilización y replegamiento son las limitantes para la obtención de estas proteínas activas usando E. coli. En este trabajo describimos la producción de GH recombinante de pejerrey (pjGHr) y las condiciones óptimas para su solubilización y plegamiento a partir de cuerpos de inclusión. A diferencia de lo que ocurre con la disolución de GH de mamíferos, no es posible desagregar pjGHr a concentraciones de urea menores a 8 M. La solubilización de los cuerpos de inclusión conteniendo pjGHr es óptima a pH 10.5, 8 M urea y dos horas de incubación en ausencia de cisteína. El método de dilución y diálisis permitió obtener un porcentaje elevado de pjGHr soluble y con un plegamiento comparable a la forma nativa.