Identificación de microARNs diferencialmente expresados en la línea celular monocítica THP1 expuesta a antígenos de Mycobacterium tuberculosis y estudio de su modulación por esteroides adrenales

FERNANDEZ, R DEL V; BONGIOVANNI, B; DIAZ, A; SANTUCCI, N. E.; D'ATTILIO, L; SPINELLI, S.V.

Congreso; XV Congreso y XXXIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2013

La tuberculosis a pesar de ser una enfermedad curable, todavía sigue siendo una causa importante de morbilidad y mortalidad en todo el mundo. Su agente etiológico, el Mycobacterium tuberculosis (Mtb) es un patógeno intracelular que sobrevive dentro de los macrófagos del hospedador. Sin embargo, solo un pequeño porcentaje de individuos infectados desarrollan la enfermedad. Estos datos sugieren que las interacciones iniciales entre el macrófago y la micobacteria juegan un rol crucial en el desarrollo de una respuesta efectiva. Asimismo, estudios preliminares realizados en nuestro laboratorio indican que los esteroides adrenales influyen sobre el tipo de activación desplegado por estas células. La caracterización de los mecanismos que median la comunicación entre el sistema inmune y el neuroendócrino en las células infectadas constituye uno de los objeticos centrales de nuestro grupo de investigación. Específicamente, este trabajo plantea iniciar la caracterización del rol que desempeñan los microARNs en la regulación de dicho proceso identificando aquellos cuya expresión se encuentra modulada por glucocorticiodes (GC) y/o dehidroepiandrosterona (DHEA) en células monocíticas tratadas con antígenos de Mtb (Tso). Los microARNs son pequeñas moléculas de ARN de entre 20 y 22 nt de longitud capaces de regular la expresión génica a nivel post-transcripcional. Los mismos se hallan involucrados en una amplia gama de eventos celulares y de desarrollo tales como la proliferación celular, apoptosis, y la diferenciación y en un sinnúmero de procesos inmunitarios. En este trabajo se determinaron los niveles de expresión de 5 miRNA (miR-155, miR-29a, miR-30c, miR-374 y let-7e) cuya expresión se encuentra alterada en macrófagos derivados de monocitos humanos infectados con micobacterias y cuyos targets corresponden a genes posiblemente asociados a la respuesta inmunoendócrina. La línea celular monocítica THP-1 fue cultivada durante 10hs en las siguientes condiciones experimentales: Ctrol, Tso, GC, DHEA, Tso+GC, Tso+DHEA y Tso+GC+DHEA (se trabajó por duplicado con dos replicas biológicas). Mediante la técnica de stem-loop RT-qPCR se logró detectar exitosamente 4 de ellos en la línea celular (miR-155, miR-29a, miR-30c y miR-let 7e), mientras que miR-374 sólo pudo ser amplificado en células provenientes de cultivo primario. Cuando se analizaron los niveles de expresión de los distintos microARNs ante el agregado de Tso se pudo observar que en nuestro modelo de estudio solo el miR-155 presentó un perfil distinto al control (Tso=36,86±0,52 unidades arbitrarias (UA) vs Ctrol=2,44±0,39 UA, media±DS). Llamativamente, dicho aumento en los niveles de expresión no fue observado en las células tratadas con Tso y esteroides adrenales, sugiriendo un efecto inhibitorio de estas hormonas sobre la expresión del microARN. En suma, los resultados preliminares obtenidos ubicarían al miR-155 con un rol preponderante en la fisiopatología de la tuberculosis humana.