Evaluación del efecto fotosensibilizante sobre albúminas séricas humana y bovina

M. BEATRIZ ESPECHE TURBAY; RITA D. DORADO; CLAUDIO D. BORSARELLI

Jornada; VII Jornadas de Estudiantes y Jóvenes Investigadores 2018; 2018

El oxígeno singlete (1O2) es una especie altamente reactiva del oxígeno no radical (ROS) ampliamente estudiada en la última década debido a su generación y a su papel en una serie de procesos fisiológicos. Los principales blancos del 1O2 en ambientes biológicos son las proteínas, provocando cambios biofísicos y bioquímicos que pueden estar relacionados con el envejecimiento y la generación del estrés oxidativo.Las albuminas séricas (AS) son proteínas abundantes en el plasma sanguíneo y cumplen con diversas funciones biológicas, como las de transporte, regulación y enzimática a través de la actividad pseudoestereasa. El objetivo del presente trabajo es evaluar el efecto de la oxidación fotosensibilizada vía 1O2 generado por fotosensibilización del complejo Rutenio (II) tris-(2,2-bipiridina) catión, ([Ru(bpy)3]2+) en presencia de oxígeno, sobre las propiedades estructurales y funcionales de las AS, humana (HSA) y bovina (BSA). Se trabajó con soluciones de AS 100 µM/[Ru(bpy)3]2+ 20 µM ambas disueltas en buffer Tris-HCl 20 mM pH 7,4, las cuales se irradiaron con un LED azul 443±20 nm. Los cambios estructurales fueron analizados a diferentes tiempos de irradiación, a través de técnicas espectroscópicas de absorbancia UV-Vis, fluorescencia estacionaria, electroforesis láser de partículas (potencial Z) y bioquímicas (carbonilos, peróxidos y SDS-PAGE). Para evaluar la funcionalidad de las AS post-fotólisis se realizaron ensayos de evaluación bioquímica para medir actividad específica pseudo-esterasa a través de un método colorimétrico. A partir de los resultados obtenidos, se concluye que ambas proteínas sufren procesos de foto-oxidación en diferente proporción, denotados por un consumo de triptófanos, formación de productos de oxidación, presencia de grupos carbonilos y cambios en la carga superficial de las mismas. Este evento oxidativo, impacta en la actividad enzimática pseudo-esterasa de las AS, disminuyendo está actividad conforme se exponen al 1O2, afectándose en mayor medida en la HSA.