Caracterización de una proteína BLUF de Acinetobacter sp. Ver3 de Laguna Verde

VALENTINA REY; LORENA VALLE; CLAUDIO D. BORSARELLI; MARÍA EUGUENIA FARÍAS; PAULA C. JAIME ; VIRGINIA H. ALBARRACÍN; INÉS ABATEDAGA

San Miguel de Tucumán

Congreso; III Tercera Reunión de Fotobiólogos Moleculares Argentinos; 2016

Grupo Argentino de Fotobiología

El  fotorreceptor  putativo  BLUF-Ver3  proviene  del  genoma  de  Acinetobacter  sp.Ver3,  un microorganismo  aislado  de  aguas  superficiales  de  Lagunas  de  Altura  de  la  Puna  Andina (LAPAs), a 4400 msnm, y conservado en el Laboratorio de Investigaciones Microbiológicas de Lagunas Andinas, LIMLA (PROIMI-CONICET) de Tucumán. El estudio de estas cepas comenzó  por  la  observación  de  la  versatilidad  y  capacidad  de  crecimiento  en  altas concentraciones  de  metales,  antibióticos  y  sales,  además  de  una  intensa  exposición  a  luz ultravioleta  (UV).  Este  fotorreceptor  posee  un  dominio  conocido  como  BLUF  (Blue  Light Sensors  Using  Flavins)  que  contiene  flavin  adenin  dinucleótido  (FAD)  como  cofactor.  Se caracterizan por absorber intensamente en la región espectral del UVA y azul (320?450 nm), y  de  ahí  su  importancia,  debido  a  la  relevancia  ambiental  y  biológica  de  esta  porción  del espectro solar sobre la superficie terrestre. Los  dominios  BLUF  son  dominios  modulares,  pueden  encontrarse  como  parte  de  una arquitectura proteica compleja (asociadas a un dominio efector) o como dominios sensores simples. Las proteínas cortas pueden estar relacionadas a interacciones proteína-proteína para la transducción de la señal lumínica. En  el  siguiente  trabajo  se  clonó  y  produjo  heterólogamente  el  fotorreceptor  putativo bacteriano  BLUF-Ver3  (mediante  el  uso  de  técnicas  de  biología  molecular  y  proteínas recombinantes) al cual se le efectuaron medidas de espectroscopía de fluorescencia para una primera caracterización. Se analizó filogenéticamente y se comparó el contexto genético de la secuencia  BLUF-Ver3  con  respecto  al  de  otras  especies  del  género  Acinetobacter.  Se realizaron pruebas de motilidad y formación de biofilm tanto en oscuridad como con luz azul a 24°C y 37°C. Mediante el uso de vectores de clonación y expresión se consiguió una proteína del tamaño estudiado,  que  une  el  cofactor  FAD  y  con  características  espectroscópicas  pertenecientes  a proteínas  que  unen  flavinas.  El  análisis  del  contexto  genético  de  BLUF-Ver3  mostró  una ubicación  diferente,  con  marcos  de  lectura  colindantes  distintos  a  los  de  los  organismos comparados,  pudiendo  este  contexto  estar  relacionado  con  el  resultado  negativo  de  las pruebas de motilidad, permitiendo suponer un diferente tipo de respuesta fisiológica para esta especie, mostrando la versatilidad de estos sensores modulares.