Detección de reguladores del ciclo celular del cardiomiocito ovino como potenciales blancos terapéuticos en regeneración cardíaca

CERRUDO, CAROLINA; CROTTOGINI, ALBERTO; LÓPEZ, AYELÉN EMILCE; BAUZÁ, MARÍA DEL ROSARIO; GHIRINGHELLI, DANIEL; BELAICH, MARIANO NICOLÁS; GIMÉNEZ, CARLOS SEBASTIÁN; LOCATELLI, PAOLA

Buenos Aires

Congreso; 44º Congreso Argentino de Cardiología; 2018

Sociedad Argentina de Cardiología

Introducción: La cardiopatía isquémica con su complicación más severa, el infarto de miocardio, constituye una de las principales causas de mortalidad a nivel mundial. Entre las terapias experimentales desarrolladas para regenerar el miocardio se encuentra la terapia celular, la cual hasta el momento no ha demostrado garantizar el acoplamiento de las células transplantadas al sincicio miocárdico, redundando solo en mejoras modestas de la función ventricular en ensayos clínicos. Es por ello que actualmente se plantea como estrategia de regeneración la inducción de la división mitótica del cardiomiocito ventricular, lo cual permitiría el acople electromecánico necesario para la óptima función del corazón. En este sentido, se plantea como necesaria la búsqueda de blancos de terapia génica, entre ellos proteínas frenadoras, así como favorecedoras del avance del ciclo celular, para ser inhibidas o estimuladas, respectivamente, y de esa forma inducir la proliferación celular.Objetivo: Nuestro objetivo fue realizar un análisis global del transcriptoma del cardiomiocito ovino para detectar genes relacionados con el ciclo celular cuyos niveles de expresión fueran significativamente distintos en fetos ovinos de dos tiempos gestacionales diferentes, y en el adulto. Materiales y métodos: Se obtuvieron muestras de ventrículo izquierdo de fetos ovinos de menos de 70 días de gestación (gestación precoz, n=3) (cardiomiocitos mitóticos), fetos de más de 100 días de gestación (gestación tardía, n=3) y de adultos sanos (n=3) (ambos post-mitóticos). El ARN mensajero obtenido de estas muestras fue secuenciado mediante RNAseq y se clasificaron mediante herramientas bioinformáticas los genes de acuerdo a su nivel de expresión y a su función, en los puntos del desarrollo mencionados. Posteriormente se seleccionaron aquellos genes con expresión diferencial en los 3 estadios y que a su vez estaban vinculados a la regulación del ciclo celular (meis2. meis3, cdkn2aip (p16), cdkn1A (p21), nkx 2.5, gata4, cdk2, cdk4, cdk5, ciclina E1, ciclina D, ciclina A, btg2, hgf, sav1, vegf A y yap1) y se confirmaron sus niveles de expresión por Real Time PCR. Análisis estadístico: Las variaciones en número de lecturas mayores al promedio del grupo experimental 2 desvíos estandar se consideraron como una diferencia de expresión estadísticamente significativa entre un estadio y el otro. Resultados: En el estadio de gestación precoz se detectó la expresión de 27196 genes (de los cuales solo 1641 eran exclusivos de esta edad gestacional), en el estadio de gestación tardía 27258 genes (1506 propios de este tiempo de gestación) y en el adulto 23377 genes (con 655 genes solo expresados en este estadio). En cuanto a la clasificación por función, nos permitió reducir el número de genes a estudiar, pudiendo confirmar con Real Time PCR las diferencias de expresión resultantes del RNAseq. Los genes analizados mostraron tres patrones distintos de expresión: a) Elevado en gestación precoz y bajo en tardía y adulto: meis3, nkx 2.5, cdk2, cdk4, cdk5, ciclina E1, ciclina D, ciclina A, hgf, vegf A, yap1 b) Elevado en gestación precoz y tardía, y bajo en adulto: meis2, cdkn21aip, gata4, btg2, sav1 c) Bajo en gestación precoz, elevado en tardía y bajo en adulto: cdkn1a. Conclusiones:Se detectó un grupo de genes relacionados a la regulación del ciclo celular, que presentaron variaciones significativas entre estadios en los que el cardiomiocito es mitótico y post-mitótico. Estos genes constituyen posibles blancos terapéuticos dirigidos a inducir la mitosis y citoquinesis del cardiomiocito adulto.