Alfa-1 Antitripsina modula la expresión de proteínas inflamatorias y otras proteínas escenciales para la retina en células ARPE-19 con alta glucemia.

POTILINSKI, MARÍA CONSTANZA; GALLO, JUAN E.; PETRIGLIANO, MICAELA; ORTIZ, GUSTAVO A.

Córdoba

Congreso; XII Congreso AIVO 2018; 2018

AIVO

La retinopatía diabética (DR) se encuentra asociada a inflamación persistente y al daño en el lecho vascular. El tratamiento actual se encuentra enfocado en las etapas más severas de esta enfermedad. Resultados previos obtenidos por nuestro grupo, muestran que la Alfa-1 Antitripsina (A1AT) actúa como un agente anti-inflamatorio que podría jugar un rol en el tratamiento de la DR. De todas maneras, es importante saber cuál es el efecto del tratamiento con A1AT sobre otras proteínas relevantes para el normal funcionamiento de la retina y cuáles son los mecanismos moleculares involucrados. El epitelio pigmentario retinal (RPE) forma el componente epitelial de la barrera hemato-retiniana. La Conexina43 (Cx43) es la proteína de las uniones gap mayormente expresada en estas células. La sobreexpresión de la Cx43 ha sido asociada al edema y a la pérdida de la integridad vascular. IRS-1 y AS160 se encuentran involucrados en la vía de señalización de la insulina y se ven afectados en la diabetes. NFkB es un factor de transcripción clave en los procesos inflamatorios y se encuentra incrementado en la DR.Evaluamos la expresión de Cx43, IRS-1, AS160, NFkB y otras proteínas asociadas a diferentes vías de señalización en un modelo in vitro de DR.Células ARPE-19 (ATCC® CRL-2302TM, Manassas, Virginia, USA) fueron cultivadas en DMEM/F12 (Invitrogen, Carlsbad, California, USA) con 2μM L-glutamina, 100U/ml penicilina, 100μg/ml estreptomicina, and 10% SFB. Las células (pasajes 9 a 12) fueron incubadas 16h con DMEM 5,5mM glucosa (Control), DMEM 5,5mM glucosa + 4.5mg/ml A1AT (Control+A1AT), DMEM 30mM glucosa (Diabéticas), DMEM 30mM glucosa + 4.5mg/ml A1AT (Diabéticas+A1AT). Las células fueron cosechadas en buffer RIPA para Western Blot o fijadas para inmunohistoquímica. La A1AT disminuyó la expresión de la Cx43, IRS-1 y AS160 y NFkB. Además, redujo los niveles de expresión de AKT y pAKT1/2/3, indicando la participación de la vía PI3K/AKT. Esta vía, se encuentra asociada a las vías de señalización de la Insulina y Wnt. A su vez, asociado a la menor expresión de NFkB, se observó una disminución expresión de iNOS y TNFa.Estos resultados soportan la hipótesis de que la A1AT modula la expresión de diversas proteínas involucradas en la respuesta inflamatoria y otras que son esenciales para el funcionamiento de la retina a través de las vías de señalización de la insulina, PI3K/AKT y Wnt. Todos estos resultados en su conjunto, muestran a la A1AT como una molécula prometedora para el tratamiento de la DR.