Estudio del fenotipo D variante por métodos serológicos y de biología molecular

MUFARREGE, NICOLÁS; LUJÁN BRAJOVICH, MELINA ELIANA; ENSINCK, MARÍA ALEJANDRA; MUFARREGE, NICOLÁS; LUJÁN BRAJOVICH, MELINA ELIANA; ENSINCK, MARÍA ALEJANDRA; TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; MATTALONI, STELLA MARIS; BIONDI, CLAUDIA; TRUCCO BOGGIONE, CAROLINA; MATTALONI, STELLA MARIS; BIONDI, CLAUDIA; PRINCIPI, CINTIA; GARCÍA BORRÁS, SILVIA; COTORRUELO, CARLOS; PRINCIPI, CINTIA; GARCÍA BORRÁS, SILVIA; COTORRUELO, CARLOS

Congreso; XVII Congreso Argentino de Medicina Transfusional; 2019

Fundamento: El fenotipo D variante (Dvar) se caracteriza por presentar una expresión débil del antígeno D en la membrana eritrocitaria. Esta expresión disminuida puede deberse a variaciones cualitativas (fenotipo D parcial) o cuantitativas (fenotipo D débil) de la proteína RhD. La identificación del fenotipo Dvar resulta de suma importancia en hemoterapia para optimizar la compatibilidad transfusional y la administración de la inmunoprofilaxis en las embarazadas. La complejidad fenotípica del sistema Rh no puede ser resuelta, en general, mediante técnicas serológicas convencionales. En este escenario, los estudios de biología molecular resultan fundamentales para la determinación inequívoca del alelo responsable del fenotipo Dvar.Objetivo: el objetivo de este trabajo fue comparar el fenotipo Dvar obtenido mediante un kit comercial de hemaglutinación con el alelo detectado a través de técnicas de biología molecular.Materiales y Métodos: se estudiaron 50 muestras con fenotipo Dvar. La expresión de los antígenos C, c, E y e fue estudiada por técnicas de hemaglutinación en tubo utilizando anticuerpos monoclonales anti-C (clon MS24), anti-c (clon MS33), anti-E (clon MS258/MS80) y anti-e (clones MS16 + MS21 + MS63). La caracterización serológica del fenotipo Dvar fue realizada con un kit comercial que permite determinar algunos fenotipos D parciales mediante el uso de anticuerpos monoclonales. Se obtuvo ADN genómico a través de un método de salting-out. La presencia de variantes alélicas D débiles y los polimorfismos asociados a los 10 exones del gen RHD fueron investigados mediante reacciones de PCR alelo-específicas. En algunos casos fueron realizados estudios de secuenciación.Resultados: De un total de 50 muestras analizadas, sólo 3 muestras mostraron un patrón de aglutinación con el kit comercial que se correspondió correctamente con el alelo detectado mediante el estudio de biología molecular. De estas muestras, 2 (4%) resultaron portadoras de los alelos D parciales RHD*DV tipo 2 y 1 (2%) fue portadora del alelo D parcial RHD*VI tipo 4. El resto de las muestras analizadas mostraron patrones de aglutinación que se correspondían con un fenotipo DIII (n=28, 56%) y DFR (n=2, 4%) y patrones de aglutinación que no permitieron la identificación del fenotipo (n=17, 34%). Los estudios de biología molecular mostraron que estas muestras resultaron portadoras de los siguientes alelos: RHD*D débil tipo 1 (n=20, 40%), tipo 2 (n=18, 36%), tipo 3 (n=1, 2%), tipo 4 (n=2, 4%), tipo 59 (n=1, 2%), tipo 93 (n= 4, 8%) y RHD*325A (n=1, 2%).Conclusiones: Estos hallazgos revelan que la utilización de este tipo de kit sólo resulta orientadora cuando se sospecha de un fenotipo D parcial. La elevada discordancia encontrada entre el análisis serológico y el estudio molecular podría deberse a la incapacidad de los anticuerpos monoclonales de detectar expresiones débiles de los epitopes D. La genotipificación RHD resulta esclarecedora del tipo de alelo responsable del fenotipo Dvar y puede contribuir a la toma de decisiones clínicas en las transfusiones y a proporcionar recomendaciones adecuadas para la profilaxis anti-D en las embarazadas.