Caracterización molecular de tres variantes alélicas responsables de un fenotipo D variante

ENSINCK A; COTORRUELO C; LUJÁN BRAJOVICH M; GARCÍA BORRÁS S; COTORRUELO C; TRUCCO BOGGIONE C; GARCÍA BORRÁS S; BIONDI C; TRUCCO BOGGIONE C; MATTALONI S; BIONDI C; MUFARREGE N; MATTALONI S; MUFARREGE N; ENSINCK A; LUJÁN BRAJOVICH M

Buenos Aires

Congreso; XVI Congreso Argentino de Medicina Transfusional; 2017

Asociación Argentina de Hemoterapia e Inmunohematología

Fundamento: El fenotipo D variante (Dvar) se caracteriza por presentar una expresión disminuida del antígeno D en la membrana eritrocitaria. Los estudios de biología molecular son fundamentales para el conocimiento de la complejidad genética responsable de dichas variantes. Actualmente se considera que los pacientes con expresión débil del antígeno D, desarrollan una respuesta inmunológica luego de la exposición a glóbulos rojos D positivo. Sin embargo, numerosos estudios clínicos han demostrado que los individuos con fenotipo Dvar originado por los alelos D débil tipo 1, D débil tipo 2 y D débil tipo 3, no producen anticuerpos anti-D.Objetivo: el objetivo de este trabajo fue caracterizar las bases moleculares de tres muestras con fenotipo Dvar de pacientes que concurrieron al Laboratorio de Inmunohematología de la Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas de la Universidad Nacional de Rosario.Materiales y Métodos: se determinó el fenotipo Rh completo por técnicas de hemaglutinación en microplaca y tubo utilizando anticuerpos monoclonales IgM e IgG. Se realizó el estudio molecular de la cigosidad RHD mediante PCR-RFLP. Mediante estrategias de PCR-SSP se investigó la presencia de variantes alélicas D débiles y se analizaron los polimorfismos asociados a los 10 exones del gen RHD. Finalmente, se realizaron estudios de secuenciación.Resultados: las muestras #1 y #3 mostraron un fenotipo Dvar, C+, c+, E-, e+, mientras que la muestra #2 resultó Dvar, C-, c+, E+, e+. El estudio del antígeno D mostró reacciones de dos cruces en lectura inmediata tanto en microplaca como en tubo que se potenciaron a cuatro cruces en fase antiglobulina. Los estudios de biología molecular permitieron detectar una caja de Rhesus híbrida en cada muestra, indicando un estado RHD hemicigota. Los análisis de secuenciación revelaron tres alelos producto de mutaciones puntuales en el gen RHD: alelo D débil tipo 59 (mutación 1148T>C en el exón 8), alelo D débil tipo 93 (mutación 359C>A en el exón 3) y alelo RHD*764A (mutación 764G>A en el exón 5).Conclusiones: las mutaciones puntuales detectadas son responsables respectivamente de los cambios aminoacídicos Leu383Pro, Ala120Asp y Gly255Glu, localizados en la región transmembrana de la proteína RhD. Si bien los patrones de reacción serológica fueron similares a los que se obtienen con fenotipos D débiles tipo 1, 2 y 3, los estudios moleculares permitieron determinar que las tres muestras eran portadoras de fenotipos D parciales. La identificación de alelos que originan fenotipos con expresión aberrante de la proteína RhD permite optimizar la selección de unidades hemocompatibles y decidir la conducta transfusional adecuada.