Importancia de la elección de reactivos en la determinación del antígeno D en pruebas de rutina inmunohematológica en un Centro Regional de Hemoterapia

MARTÍNEZ OVIEDO M; MUFARREGE N; COTORRUELO C; COTORRUELO C; MATTALONI S; MATTALONI S; TRUCCO BOGGIONE C; TRUCCO BOGGIONE C; DE GOROSTIZA G; DE GOROSTIZA G; LUJÁN BRAJOVICH M; LUJÁN BRAJOVICH M; LERI M; LERI M; MARTÍNEZ OVIEDO M; MUFARREGE N

Buenos Aires

Congreso; XVI Congreso Argentino de Medicina Transfusional; 2017

Asociación Argentina de Hemoterapia e Inmunohematología

Fundamento: la presencia o ausencia del antígeno D en la membrana eritrocitaria determina que un individuo sea RhD positivo o RhD negativo. La expresión aberrante de este antígeno es responsable del fenotipo D variante (Dvar). La detección del antígeno D a nivel serológico es realizada utilizando diferentes anticuerpos anti-D monoclonales mediante técnicas de hemaglutinación. Algunos reactivos anti-D utilizados en las pruebas inmunohematológicas de rutina no permiten discriminar variantes D de un fenotipo D positivo normal, tipificando a dichas muestras como D positivo. Esto puede ocasionar discrepancias entre laboratorios que determinan el fenotipo RhD utilizando diferentes reactivos.Objetivos: el objetivo de este trabajo es caracterizar el antígeno D en dos muestras de sangre que presentaron discrepancias en la determinación del fenotipo RhD.Materiales y Métodos: se estudiaron 2 donantes de sangre (D1 y D2) que concurrieron al Banco Central de Sangre . Estudios serológicos previos indicaban que ambos donantes eran portadores de un fenotipo D negativo. Se estudió el fenotipo ABO y RhD utilizando tarjetas ABO/Rh (2D). En las mismas, la detección del antígeno D se realiza por duplicado con diferentes clones anti-D: pocillo D: clon P3x61 y pocillo D´: clones P3x290, P3x35, P3x61, P3x21223B10. Además, se analizó la presencia del antígeno D en placa con los reactivos anti-D-IgM I (clon MS-201), antiD-IgM II (clon RUM1) y anti-D Blend (clones TH 28/MS-26). La prueba de Coombs Indirecta (PCI) para la determinación del antígeno D se realizó en tarjetas Liss-Coombs con el anti-D blend. Posteriormente, se realizaron estudios moleculares utilizando estrategias de PCR alelo específicas para analizar la presencia de las variantes alélicas D débiles más frecuentes (Tabla 2).Resultados: los estudios de detección del antígeno D utilizando la técnica en tarjeta en las muestras de sangre de ambos donantes mostraron un resultado positivo. Sin embargo, se obtuvieron resultados discrepantes al analizar el fenotipo RhD en placa con los reactivos anti-D IgM I y II y anti-D blend (Tabla 1).Tabla 1: Reactivos utilizados y reacciones obtenidas.Pocillo DgelPocillo D´gelAnti-D IgMIplacaAnti-D IgMIIplacaAnti-D BlendplacaPCIgelPCDD14+3+0002+0D24+3+0004+0Estudios moleculares posteriores permitieron caracterizar a las variantes alélicas RHD presentes en cada uno de los donantes responsables del fenotipo D variante observado (Tabla 2).Tabla 2: Fenotipo Rh y genotipo RHD.Fenotipo RhGenotipo RHDD1Dvar cceeDdébil tipo1D2Dvar CceeDdébil tipo3Conclusión: reportamos dos casos de discrepancias en la determinación del fenotipo RhD utilizando diferentes técnicas y clones anti-D. Los resultados obtenidos demuestran la importancia de considerar la sensibilidad de técnicas y reactivos al comparar los resultados obtenidos en la determinación del antígeno D. Destacamos la importancia de la biología molecular para resolver las discrepancias halladas.