Expresión diferencial del canal de protones (Hv1) en células de origen linfoide y mieloide: nuevo rol del canal en el contexto de desregulación metabólica.

ISSOURIBEHERE, DIEGO; FANESSI, VIVIANA; SCANDIZZO, HILDA EMILIA; ENRIQUE, NICOLÁS; ASUAJE, AGUSTÍN; BORDONE, JAVIER; VENTURA, CLARA; MARTÍN, PEDRO; MILESI, MARIA VERÓNICA

Mendoza, Argentina

Congreso; XXIV CONGRESO ARGENTINO DE HEMATOLOGÍA; 2019

Sociedad Argentina de Hematologia

Se ha demostrado en distintos tipos de cáncer que las células tumorales realizan un cambio del metabolismo energético hacia vías glicolíticas, que terminan generando una mayor concentración de especies ácidas. Este fenómeno se conoce como efecto Warburg [1] y actualmente se considera a esta desregulación metabólica como una de las características comunes distintivas del cáncer (del inglés hallmarks of cancer) [2]. De no mediar mecanismos de compensación que eliminen el exceso de ácido generado por el cambio metabólico, la sobrevida de la célula tumoral estaría comprometida. Por lo tanto, las estructuras celulares capaces de disminuir la carga ácida, le otorgan una ventaja de escape de la apoptosis y una mayor posibilidad de proliferación tumoral. El canal Hv1 es una proteína de membrana capaz de mediar el eflujo de H+ y su actividad representa una vía rápida para revertir cargas ácidas. Nuestra hipótesis plantea que tanto su expresión como su actividad puede estar aumentada en las células tumorales, evitando la acidificación intracelular generada por el aumento del metabolismo, confiriendo a las células neoplásicas una vía de escape de la apoptosis.El canal Hv1 se expresa y es funcional en todas las células del sistema inmune. Sin embargo se desconoce su patrón de expresión y su rol funcional en las neoplasias hematológicas, las cuales presentan la desregulación metabólica característica de las células tumorales [3].OBJETIVOSEn este marco general, este trabajo tiene un primer objetivo que es cuantificar la expresión del canal Hv1 en células tumorales de origen linfoide y mieloide de pacientes con derivación clínica para diagnóstico de neoplasia hematológica. Específicamente, mediante el uso de un anticuerpo específico para el canal evaluamos la expresión del mismo en los distintos tipos celulares que componen las muestras de aspirado de médula ósea. Posteriormente y en función de los resultados obtenidos estudiaremos sus propiedades electrofisiológicas y su rol funcional en este tipo de patologías.MATERIAL Y MÉTODOSEn colaboración con el Servicio de Citometría de Flujo del sector Hematología del Laboratorio del Hospital El Cruce de la Prov. de Buenos Aires, cuantificamos la presencia del canal Hv1 en muestras de aspirado de médula ósea de pacientes con derivación clínica para diagnóstico de neoplasia hematológica.Las muestras llegan al sector en tubos anticoagulados con EDTA y se procesa con los protocolos clásicos de preparación de las células para citometría. Se realizó la cuantificación de la intensidad de fluorescencia del marcador del canal Hv1 y se compararon los valores obtenidos en las células patológicas con los valores de las células residuales normales de la misma estirpe. Se utilizó el Test de Mann-Whitney no paramétrico para analizar la significancia estadística de los niveles de marca del canal en las poblaciones celulares normales y patológicas. Se analizaron hasta la fecha 5 casos con las siguientes patologías linfoides crónicas: Mieloma múltiple MM (1), Linfoma no-Hodgkin T (LGL-T (1), otros (2) y LNH-T Enfermedad Mínima Residual (1)).Los resultados obtenidos se presentan en el siguiente gráfico como diferencias de intensidad de fluorescencia (IF), comparando células patológicas con células residuales normales (GRAFICO)CONCLUSIONESDe este primer análisis se observa que nuestra hipótesis se verifica en muestras de pacientes con patologías oncohematológicas de tipo T, en las cuales se encontró una mayor expresión del canal en las células tumorales que en las normales. Este resultado es altamente promisorio y constituye la base para continuar el estudio funcional del canal de manera de dilucidar si esta diferencia en la expresión se traduce en un rol funcional diferencial que nos permita proponerlo como un blanco específico para inducir la acidificación de la célula tumoral e inducción de apoptosis, en concordancia con lo que previamente demostramos en una línea celular proveniente de una leucemia humana de tipo T, como son las células Jurkat [4].