Modificación de nanopartículas de oro con anticuerpos anti-IgE para el diagnóstico de alergias alimentarias

GUILLERMO DOCENA; CECILIA I. MUGLIA; MARÍA ELISA DE SOUSA; CAROLINA VERICAT

Carlos Paz, Cordoba

Congreso; XX Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2017

Motivación. Las alergias alimentarias son trastornos causados por una disfunción en la regulación del sistema inmune que genera una respuesta inflamatoria contra un alérgeno alimentario. Cuando son mediadas por anticuerpos IgE pueden generar anafilaxia, por lo que es importante determinar en el diagnóstico la presencia de anticuerpos IgE. Estos análisis se realizan normalmente mediante inmunoensayos (ELISA); sin embargo, esta técnica debe ser realizada en un laboratorio por personal capacitado, es costosa y no existe variedad de kits comerciales. Por lo tanto, el empleo de ensayos en el punto de cuidado (POC) es una opción interesante, ya que no requieren prácticamente de personal ni de equipamiento especializados, son fáciles de efectuar en cualquier lugar y proveen un resultado en pocos minutos.(1) El formato de diagnóstico POC más común es el inmunoensayo de flujo lateral (LFIA), en el cual se emplean anticuerpos (en este caso anti-IgE) previamente conjugados con nanopartículas de oro (AuNPs) y el resultado se interpreta como la presencia o ausencia de líneas coloreadas correspondiente al conjugado anticuerpo- AuNP que reconoce a la IgE en la zona de reacción.(2)Resultados. Se optimizaron los protocolos para dos estrategias de inmovilización diferentes de un anticuerpo anti-IgE monoclonal sobre AuNPs de 20 nm de diámetro. En primer lugar se realizó la inmovilización por fisisorción, para lo cual se realizaron ensayos de floculación.(3,4) La segunda estrategia consiste en la formación de un enlace amida entre la proteína y el recubrimiento de tioles carboxilados de las AuNPs empleando carbodiimida como reactivo de acoplamiento.(4,5) En ambos casos los conjugados anticuerpo-AuNP se purificaron y las dispersiones resultaron ser estables en el tiempo, sin observarse agregación. Además se halló a partir de ensayos ELISA modificados que el anticuerpo no pierde su actividad como resultado de la inmovilización sobre la superficie de oro.Conclusiones y perspectivas. Con ambas estrategias fue posible obtener conjugados anti-IgE ? AuNP estables sin que el anticuerpo perdiera su actividad. Los mismos serán inmovilizados sobre una fase de nitrocelulosa adecuada para desarrollar el LFIA.Referencias1)Gubala, V.; Harris, L. F.; Ricco, A. J.; Tan, M. X.; Williams, D. E., Anal. Chem., 2012, 84, 487-515.2)Wong, R. C.; Tse, H. Y., Lateral Flow Immunoassay. Humana Press: New York, 2009.3)Xie, H. et al., Anal. Chem. 2003, 75, 5797-5805.4)Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques. Academic Press: London, 2008.5)Haller, E.; Lindner, W.; Lämmerhofer, M., Anal. Chim. Acta, 2015, 857, 53?63.