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Caracteres que definen los nichos de los organismos ofrecen una línea de evidencia para evaluar la separación de linajes. Leptodactylus gracilis se distribuye en áreas subtropicales sudamericanas. A través de una búsqueda de puntos de presencia en museos y bibliografía se deduce la existencia de dos poblaciones disyuntas, separadas por al menos 300 km sin que exista una barrera geográfica evidente: a) al noroeste de Argentina y sur de Bolivia y b) al noreste de Argentina, Uruguay, sur de Brasil y este de Paraguay. Ante esta evidencia, nos propusimos inferir procesos de especiación incipiente en esta especie a través de un análisis de conservadurismo de nicho, mediante el cual se determina si las poblaciones a y b presentan nichos ambientales más similares de lo que se espera por azar, y si esta similitud es menor o mayor a la interespecífica, considerando a las especies del mismo clado (L. jolyi, L. latinasus y L. sertanejo). El nicho ambiental de cada población y especie se definió en base a los componentes principales de variables climáticas. Se evaluó la similitud de nicho tomando en cuenta el área accesible y los puntos de presencias para cada población y especie. La similitud de nicho de ambas poblaciones de L. gracilis es mayor a la esperada por azar, aunque menor que la del par L. gracilis b-L. latinasus. Se concluye que nicho de L. gracilis es poco conservado, señalando una separación en las preferencias climáticas y una divergencia incipiente en los linajes de ambas poblaciones analizadas.