Uso del microscopio de captura láser para el análisis de expresión génica en células individuales de muestras complejas

DURANDO M; VARAYOUD J

Congreso; IV Congreso Iberoamericano de Salud Ambiental para el Desarrollo Sustentable XX Congreso Argentino de Toxicología XXXV Jornadas Argentinas Interdisciplinarias de Toxicología; 2017

La microdisección por capturalaser (MCL) es una poderosa técnica de microscopía que permite aislarpoblaciones celulares de elevada pureza a partir de secciones tisularesheterogéneas, preparaciones citólogicas o células en cultivo. Con las células obtenidas sepueden realizar análisis posteriores para evaluar expresión génica, deproteínas, actividades enzimáticas o, incluso metabolitos, lo que permiteanalizar las funciones de una célula o tejido concretos. En la última década la MCL seha convertido en un magnífico aliado de las técnicas de última generación parael análisis masivo del transcriptoma, el proteoma o el metaboloma aportandoinformación global sobre los procesos que tienen lugar en determinadoscompartimentos tisulares. La MCL es compatible con unaamplia variedad de tipos de tejidos, métodos de tinción y protocolos deconservación de los tejidos, permitiendo la obtención de células de muestrastanto frescas como de archivo. Los principales componentes dela tecnología MCL son: a) la visualización microscópica de las células deinterés; b) la utilización de láser infrarrojo (IR) y/o ultravioleta (UV) paraseleccionar las células; c) la remoción de éstas a partir de una seccióntisular heterogénea. En este taller nos proponemos:a) explicar las generalidades de la técnica de MCL; b) brindar las herramientasteóricas necesarias para el correcto tratamiento de la muestra destinada a MCL;c) realizar una visita al microscopio de captura láser instalado en nuestroInstituto.Respecto de las generalidades,abordaremos usos, ventajas y desventajas de la técnica; con especial énfasis enla revisión bibliográfica de su aplicación en el área de Toxicología Genética yToxicología Forense.Respecto del tratamiento de lamuestra abordaremos cuestiones metodológicas referidas a la obtención de lamisma (precauciones y cuidados en su manipulación, calidad de los reactivos autilizar); como así también, un análisis y descripción detallados de losprotocolos a seguir para obtener las células y moléculas de interés. Finalizados los conceptosteóricos, realizaremos una visita al ISAL, para observar un microscopio decaptura láser y los  insumos que serequieren para su funcionamiento.Confiamos en que este taller brindará a la comunidadcientífica la posibilidad de conocer esta herramienta e informarse sobre losposibles usos y aplicaciones de una técnica altamente sensible para estudiar laexpresión de moléculas a partir de un número reducido de células.