Hiperplasia uterina prepuberal e hipermetilación de Hoxa10 como mecanismo de silenciamiento del gen por la exposición postnatal a un herbicida a base de glifosato

MILESI MM; VARAYOUD J; GUERRERO SCHIMPF ML; LUQUE EH; INGARAMO PI

Buenos Aires

Simposio; Simposio Internacional Programa RAICES (Red de Científicos Argentinos en el Noreste de EE.UU) "Ganando la lucha contra el cáncer"; 2016

La exposición a perturbadores endócrinos durante períodos críticos del desarrollo se ha asociado a procesos de transformación neoplásica. Asimismo, se sabe que los carcinomas de endometrio presentan una desregulación del gen homeótico Hoxa10, vinculada a cambios en su estado de metilación. Nos propusimos evaluar los efectos de un herbicida a base de glifosato (HBG) sobre la morfología uterina, la proliferación celular y la expresión de Hoxa10. Crías hembra de rata fueron tratadas vía sc los días postnatales (DPN) 1, 3, 5 y 7 con solución fisiológica (control) o con una formulación comercial a base de glifosato, 2 mg de glifosato/kg (grupo HBG). Transcurridas 24 hs de la última inyección (DPN8), los animales fueron sacrificados y se obtuvieron muestras de útero que fueron incluidas en parafina o conservadas a -80ºC. La histoarquitectura uterina se caracterizó mediante hematoxilina-eosina y por inmunohistoquímica se cuantificó la expresión del marcador de proliferación Ki67. Por RT-PCR en tiempo real se evaluó la expresión relativa del ARNm de Hoxa10 y de las ADN metiltransferasas (DNMT) 3a y 3b. En regiones regulatorias del gen Hoxa10 se investigó la presencia de islas CpG y de sitios de restricción para la enzima BstUI a fin de evaluar los niveles de metilación del ADN a través de PCR en tiempo real basada en enzimas de restricción sensibles a metilación (MSRE-PCR, del inglés Methylation-Sensitive Restriction Enzymes-PCR). Los resultados indicaron que el 75% de los animales expuestos al HBG presentó hiperplasia epitelial en asociación con un aumento en el espesor del estroma subepitelial y del miometrio. Adicionalmente se observó un incremento en la proliferación celular en el epitelio luminal y el estroma subepitelial. La exposición a HBG provocó una caída en la expresión del ARNm de Hoxa10, vinculada a un aumento en los niveles de metilación del ADN. No se detectaron cambios en los niveles de ARNm de las DNMT3a y 3b. La exposición a HBG en ratas prepuberales induce hiperplasia uterina y silenciamiento en la expresión de Hoxa10, asociada a hipermetilación del gen. Estos cambios podrían predisponer al desarrollo de tumores endometriales a largo plazo.