LOS NEUTRÓFILOS HUMANOS LIBERAN VESÍCULAS EXTRACELULARES EN RESPUESTA A LA TOXINA SHIGA 2

KEITELMAN IA; VERA AGUILAR D; RAMOS MV; GALLETTI J; SABBIONE F; SHIROMIZU CM; VEREERTBRUGGHEN A; ROSATO M; FUENTES F; PALERMO M; GOMEZ F; PEREZ PS; JANCIC C; AMARAL MM; TREVANI A

Buenos Aires

Simposio; PRIMER SIMPOSIO ARGENTINO DE ESCHERICHIA COLI PRODUCTOR DE TOXINA SHIGA RESPONSABLE DEL SÍNDROME URÉMICO HEMOLÍTICO; 2022

La bacteria Escherichia coli productora de toxina Shiga (Stx)(STEC) es un patógeno entérico no invasivo que coloniza el intestino, donde libera la Stx que se transloca a circulación y puede producir Síndrome Urémico Hemolítico (SUH). Los neutrófilos (PMN) son reclutados al intestino tras la infección por STEC, siendo la neutrofilia un evento típico en el SUH y factor de mal pronóstico. Estudios previos sugieren que la Stx podría ser transportada hasta órganos blanco como el riñón en vesículas extracelulares (VE) generadas por las células del sistema inmune. El objetivo de este trabajo fue determinar si los PMN producen VE en respuesta a la Stx2 (VE-Stx), si las mismas contienen la Stx y su impacto sobre la viabilidad y la capacidad de producir citoquinas por células del endotelio glomerular humano (HGEC). Para ello, aislamos PMN humanos de sangre periférica de dadores sanos por gradiente de Ficoll-Triyosom, sedimentación en Dextrán y lisis hipotónica. Además, cultivamos HGEC obtenidas bajo consentimiento informado, de pacientes pediátricos sometidos a nefrectomías realizadas por uropatías segmentarias o tumor en uno de los polos. Los PMN fueron incubados con 100 ng/ml Stx2 purificada (Tuffs Medical Center), Stx2 inactivada por calor (Stx Ø) o vehículo (C) por 4 h para luego aislar las VE generadas mediante centrifugación diferencial. Mediante microscopía confocal (n=4) y a través de la detección del marcador CD63 por Western Blot (n=6), comprobamos que los PMN producen VE tanto en la condición control como en respuesta a la Stx2. Mediante un ensayo de viabilidad empleando la línea celular VERO sensible a la acción tóxica de la Stx, comprobamos que las VE-Stx transportan Stx2 ya que disminuyeron significativamente la viabilidad de dichas células en comparación con las VE-StxØ y VE-C (n=10; p