Influencia de las señales intracelulares del ácido hialurónico sobre la capacitación y el metabolismo espermático y en el estado redox del potencial cigoto bovino

SILVINA FERNÁNDEZ; MARIANA CÓRDOBA; SERGIO MORADO; PABLO CETICA

Tandil

Congreso; IV Congreso Internacional de la Sociedad Argentina de Tecnologías Embrionarias; 2018

Sociedad Argentina de Tecnologías Embrionarias (SATE)

Si bien la heparina es el inductor de la capacitación más utilizado en rumiantes, el ácido hialurónico (AH) comenzó a ser utilizado en otras biotecnologías reproductivas como la fecundación in vitro (FIV). La adenilato ciclasa de membrana (ACm) es una enzima que participa en las señales intracelulares de la capacitación espermática con heparina y AH. Nuestro objetivo fue estudiar la inducción de la capacitación in vitro con heparina o AH y su relación con la tasa de clivaje y el estado redox del potencial cigoto bovino inhibiendo la actividad de ACm. Se utilizó 2´,5´-dideoxiadenosina (2,5-D) como inhibidor específico de ACm. La capacitación fue evaluada por clorotetraciclina, la viabilidad espermática mediante azul tripán, el consumo de oxígeno espermático por polarografía y la actividad de creatina quinasa por espectrofotometría. La FIV se realizó con semen congelado en pajuelas, descongelado en fluido oviductal sintético modificado (mSOF), centrifugado y resuspendido hasta una concentración final de 2x106 espermatozoides mótiles/ml. La co-incubación de espermatozoides y complejos ovocito-cumulus se realizó en mSOF adicionado de heparina o AH y BSA a 39ºC, 5% CO2 y 100% de humedad durante 21h. El clivaje se evaluó a las 48hs post FIV (n= 326 cigotos) y el estado redox a las 7hs utilizando RedoxSensor Red CC1 (n= 123 cigotos). Se realizaron 5 repeticiones y los datos fueron expresados como Media ± SD. Los resultados de las pruebas en espermatozoides fueron analizados a través de ANOVA y test de Tukey (P<0,05). La tasa de clivaje se analizó mediante la prueba de Chi cuadrado (P<0,05). La capacitación con heparina (32,004,32%) fue significativamente superior respecto a la de AH (24,002,42%), al igual que la tasa de clivaje (69,33±7,57 vs. 41,33±4,72%). En las muestras incubadas con AH, el consumo de oxígeno fue menor al obtenido con heparina, pero no se observaron diferencias significativas en el estado redox de los potenciales cigotos producidos con ambos tratamientos. La 2,5-D inhibió la capacitación con AH (42%) y con heparina (100%), sin afectar la viabilidad. Con AH la actividad oxidativa de los cigotos fue significativamente menor en las muestras tratadas con 2,5-D (0,79±0,38x106 vs. 1,22±0,45x106 unidades arbitrarias/ovocito), sin embargo no se observaron diferencias en la tasa de clivaje embrionario. Con respecto a la actividad de creatina quinasa los valores observados en las muestras capacitadas con heparina fueron menores a los correspondientes a la capacitación con AH (20,57±4,17 U/108esp x 102 vs. 36,87±6,98 U/108esp x 102), mientras que al agregar el inhibidor en muestras con AH la actividad de la enzima no se modificó (34,25±9,60 U/108esp x 102). La menor actividad oxidativa de los potenciales cigotos podría estar relacionada con la disminución en la capacitación espermática observada con el inhibidor de ACm debido a que la inhibición retardaría la activación del ovocito. Esa disminución, sin embargo, no afectaría el número de embriones clivados.