METABOLISMO DE LÍPIDOS ENDÓGENOS DE OVOCITOS BOVINOS DURANTE LA MADURACIÓN IN VITRO EN AUSENCIA DE SUSTRATOS OXIDATIVOS.

BREININGER ELIZABETH; GAGNETEN PAULA; GUTNISKY CYNTHIA; CETICA PABLO

Jornada; IX Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2019

Secretaría de Ciencia y Técnica. Facultad de Ciencias Veterinarias-UBA

METABOLISMO DE LÍPIDOS ENDÓGENOS DE OVOCITOS BOVINOS DURANTE LA MADURACIÓN IN VITRO EN AUSENCIA DE SUSTRATOS OXIDATIVOS.GAGNETEN P.1,2, BREININGER E.1,2,3, CETICA P.1,2,3,GUTNISKY C.1,2,31Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de química biológica; 2Universidad de Buenos Aires. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA); 3Universidad de Buenos Aires - CONICET. Instituto de Producción Animal (INPA). Buenos Aires, Argentina. Los estudios metabólicos llevados a cabo en Complejos ovocito-cumulus (COCs) refieren principalmente al metabolismo de los hidratos de carbono, que suelen ser los principales sustratos presentes en los medios de cultivo de rutina. Hay poca información acerca del uso de los lípidos endógenos como sustratos oxidativos. El objetivo de este trabajo será evaluar el consumo de lípidos endógenos en COCs bovinos, durante la maduración in vitro en medios deprivados de sustratos oxidativos. Los COCs serán madurados en un medio sin sustratos oxidativos TALP Fert (sin piruvato y lactato) con 50 µg/ml de sulfato de gentamicina, 0,2 mg/ml de FSH, 2 mg/ml de LH, 10 ng/ml de EGF, 5 µg/ml de insulina y 1 mg/ml de PVA, bajo aceite mineral a 39ºC, 5% CO2 en aire y 100% de humedad durante 22 hs. Para el control positivo 1 se adicionará 5,5 mM de glucosa. Como activador e inhibidor de la β-oxidación de ácidos grasos se utilizará L-carnitina (control positivo 2) y etomoxir (control negativo), respectivamente, a concentraciones a determinar. El porcentaje de maduración nuclear será evaluado por la presencia de la metafase II según técnica de Hoechst. Para determinar la variación en el contenido de lípidos neutros de los ovocitos bovinos durante la maduración, los ovocitos denudados inmaduros y madurados in vitro serán teñidos con Rojo Nilo. Se cuantificará la fluorescencia a partir de microfotografías digitales obtenidas en un microscopio de epifluorescencia (filtro 510-590 nm). Las imágenes digitalizadas serán analizadas utilizando el software IMAGE J valorando la luminosidad individual de cada ovocito. El contenido de lípidos neutros será expresado en unidades arbitrarias/ovocito. Finalmente la maduración citoplasmática será evaluada mediante fecundación in vitro utilizando semen congelado-descongelado de toro de probada fertilidad. El semen será descongelado a 37ºC en medio mSOF, centrifugado dos veces a 500xg por 5 minutos y luego resuspendido con el medio de fecundación a una concentración final de 2 x 106 espermatozoides mótiles/ml. La fecundación será realizada en medio IVF-mSOF, bajo aceite mineral a 39ºC, 5% CO2 en aire y 100% de humedad durante 18-20 hs. Se determinará el porcentaje de clivaje a las 48 hs post inseminación.