Evaluación de la actividad de enzimas relacionadas con el estado redox en gametas porcinas

BREININGER E; RODRIGUEZ P; GUTNISKY C.; PEREYRA V.; SATORRE M.M.; CETICA P.; PARIS DUPRAT M.L.; ALVAREZ G.

Buenos Aires

Jornada; V Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA); 2017

Escuela de Graduados - INITRA, Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA

La biotecnología de la reproducción en la especie porcina, contrariamente a loobservado en la especie bovina, tiene escaso desarrollo, limitándose únicamente al uso de semen refrigerado en inseminación artificial. La utilización restringida de las técnicas biotecnológicas a tareas de investigación o a establecimientos pecuarios que emplean material genético de alto valor se debe principalmente a los resultados subóptimos alcanzados tanto en el congelamiento como en la fecundación y la producción de embriones in vitro. En esta especie existen relativamente pocos estudios que demuestren a nivel bioquímico la relación existente entre la actividad enzimática y los procesosconducentes a la adquisición de gametas viables para la fecundación y producción de embriones in vitro. Varias son las enzimas que tienen un rol fundamental en el metabolismo de las gametas que requieren NAD(P)/NAD(P)H; sin embargo, la fuente de estos equivalentes de reducción aún no ha sido bien establecida. El objetivo del presente trabajo fue determinar en extractos provenientes de espermatozoides (Z) y complejos ovocitos-cumulus (COCs) porcinos la actividad de enzimas relacionadas con el estado redox: isocitrato deshidrogenasa NADP dependiente (IDH-NADP) y lactato deshidrogenasa (LDH). La actividad enzimática se determinó por espectrofotometría en extractos de Z provenientes de semen fresco o criopreservados en pajuelas y en COCs. Para la obtención de los extractos, los Z y los COCs inmaduros se resuspendieron en agua destilada, se sonicaron (4 min, 50%), se centrifugaron (17000xg, 20 min, 4°C) y las actividades enzimáticas se determinaron en los sobrenadantes. Las unidadesenzimáticas (U) se definieron en función de cada enzima evaluada. Para la ICDHNADP la U se definió como la cantidad de enzima cataliza la reducción de 1 µmol de NAD/min. En la enzima LDH la U se definió como la cantidad de enzima que cataliza la oxidación de 1 µmol de NADH/min. Los resultados se expresaron como media ± SD. La actividad de IDH-NADP fue 8,43±3,89 y 1,20±0,57 U/1010 Z en Z frescos y criopreservados, respectivamente y 2,81±0,64 x10-5 U/COC. Para la LDH fue 3,90±0,53 y 0,65±0,09 U/1010 Z en Z frescos y criopreservados, respectivamente y 1,3±0,4 x10-4 U/COC. La determinación de la actividad enzimática constituye un punto de partida para la determinación de la participación de diferentes vías en el metabolismo de las gametas porcinas. Dicha información puede ser útil para la formulación de medios de cultivo específicos para ser usados en las técnicas biotecnológicas.