Resultados preliminares de la evaluación de estrés oxidativo en espermatozoides porcinos criopreservados

BREININGER E; PEREYRA V

Congreso; VII Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2017

La criopreservación está asociada con el aumento del nivel de ERO (Especies Reactivas del Oxígeno) y la consecuente generación de estrés oxidativo provocando la alteración de la funcionalidad del semen debida a daños en el ADN y alteraciones del citoesqueleto que conllevan a disminución de viabilidad celular, y pérdida diferencial de enzimas asociadas a la generación de energía produciendo alteraciones de la movilidad. El espermatozoide porcino es especialmente susceptible al daño por peroxidación lípidica debido al alto contenido de ácidos grasos insaturados en su membrana. En contraposición, este tipo celular cuenta con un sistema antioxidante complejo dentro del cual, en la especie porcina, destaca la enzima superóxido dismutasa (SOD) por sobre la actividad de la glutatión peroxidasa y catalasa. El objetivo de este trabajo fue comparar el nivel de daño oxidativo entre espermatozoides porcinos frescos y criopreservados mediante las determinaciones de actividad de SOD, peroxidación de lípidos de membrana y nivel de especies reactivas del oxígeno. Se realizaron determinaciones en muestras de tres verracos, se analizaron por la prueba de t de student, expresando todos los resultados en media ± SEM. .La actividad de SOD se midió por inhibición de la autooxidación de la epinefrina, mediante espectrofotometría a 480 nm durante 5 minutos, a 30°C. Se definió como unidad enzimática a la cantidad de SOD necesaria para inhibir en un 50% la autooxidación de la epinefrina. La peroxidación de lípidos de membrana se determinó por el ensayo del ácido 2-tiobarbitúrico, expresándose los resultados como nmol de TBARS (sustancias que reaccionan con ácido tiobarbiturico)/108 espermatozoides. La técnica de 2,7 diclorofluoresceína (DCHF-DA) combinada con la determinación de FDA (actividad de esterasas) se utilizó para la determinación de especies reactivas de oxígeno. Su evaluación se realizó por análisis de fotografías obtenidas en el microscopio UV al exponer las muestras a 510 nm y expresando los resultados en Unidades Arbitrarias de Fluorescencia (UAF) por espermatozoide. La actividad de SOD fue mayor (p