Efecto del trolox en semen bovino postdescogelado

GADZE TA; CÓRDOBA M; CETICA P; FERNÁNDEZ S

CABA

Jornada; XI Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2022

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires

La producción de especies reactivas del oxígeno(ROS) es un proceso normal que ocurre en las células; pero en los ambientes in vitro y bajo ciertascondiciones estresantes se puede producir un aumento de las ROS con el consecuente daño oxidativo y alteración de la función celular. El papel de las ROS y/o de sustancias antioxidantes en la manipulación y cultivo de gametas y embriones in vitro es contradictorio, reportándose tanto efectos dañinos como benéficos. Nuevos antioxidantes como el trolox han surgido y sus propiedades y acciones en diferentes sistemas biológicos se están analizando. A la fecha no hay suficiente evidencia acerca de las concentraciones óptimas en las que el trolox podría ejercer un efecto benéfico en el manejo in vitro de los espermatozoides, ni de su subsecuente efecto sobre la fecundación el desarrollo embrionario. El objetivo del trabajo es estudiar el efecto del trolox en semen bovino postdescongelado sobre diferentes parámetros de evaluación espermática. Se utilizaron pajuelas de semen congelado de toros de probada fertilidad, las mismas fueron descongeladas en pool, resuspendidas en medio TALP, centrifugadas a 2000 rpm durante 5 minutos y el pellet fue resuspendido en medio TALP + Calcio + Seroalbúmina bovina. Las muestras se evaluaron a tiempo 0 y luego se fraccionaron en 4 grupos que se incubaron por 15 minutos: a) sin la adición de ninguna sustancia (control), b) con 10 UI/ml de heparina como inductor de la capacitación espermática, c) con 200 μM de trolox y d) con heparina y troloxa las concentraciones ya mencionadas. Se evaluaron la motilidad rectilínea progresiva (MRP), elvigor y la funcionalidad de la membrana plasmática (HOST) por microscopía óptica, la viabilidady la integridad acrosomal por la coloración de azul tripán y patrón acrosomal por microscopíainterferencial diferencial y el potencial de membranabrana mitocondrial (JC1) y la inducción de la capacitación espermática (CTC) por microscopía de fluorescencia. Todos los datos fueron analizados mediante ANOVA y Post-ANOVA con el test de Bonferroni (p<0,05). La MRP disminuyó debido al tiempo de incubación en los 4 grupos independientemente del tratamiento (p<0,05), no encontrándose diferencia entre los mismos. No se observaron diferencias en el vigor, la funcionalidad de membrana y el porcentaje de espermatozoides vivos con acrosoma intacto entre los grupos. El agregado de heparina aumentó el número de espermatozoides capacitados (p<0,05), independientemente del agregado de trolox. El agregado de heparina y/o trolox produjo un mayor porcentaje de espermatozoides con alto potencial de membrana mitocondrial respecto al tiempo 0 y al control (p<0,05). En la capacitación espermática se induce un alto potencial de membrana mitocondrial y con el antioxidante trolox se logra un aumento de potencial similar. Actualmente estamos trabajando en dilucidar este efecto sobre la funcionalidad y el metabolismo espermático.