Proyecto resveratrol y trolox en la preparacion de las gametas bovinas para la fecundacion in vitro, efecto sobre el desarrollo embrionario

SERGIO MORADO; MARIANA CÓRDOBA; SILVINA FERNÁNDEZ; TOMÁS GADZE; PABLO CETICA

Jornada; X Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2021

El objetivo del trabajo es estudiar la influencia del resveratrol y/o trolox en los procesos que preparan a las gametas bovinas para la fecundación in vitro y su impacto en el desarrollo embrionario. La producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) es un proceso normal que ocurre en la célula; pero en los ambientes in vitro, que presentan mayor concentración de oxígeno, se produce un aumento de las ROS con el consecuente estrés oxidativo y la alteración de la función celular. El papel de las ROS y/ o sustancias antioxidantes en la manipulación y cultivo de gametas y embriones in vitro es contradictorio, reportándose tanto efectos dañinos como benéficos. Nuevos antioxidantes como el resveratrol y el trolox han surgido y sus propiedades y acciones en diferentes sistemas biológicos se están analizando. A la fecha no hay suficiente evidencia acerca de las concentraciones óptimas en las que el resveratrol o el trolox pueden ejercer un efecto benéfico en el manejo in vitro de los ovocitos y espermatozoides, ni de la combinación de ambos antioxidantes, así como su subsecuente efecto sobre el desarrollo embrionario. Se evaluará el efecto de la adición de distintas concentraciones de resveratrol y/o tolox al medio de maduración de ovocitos in vitro y al medio de estabilización del semen luego del descongelado. Los complejos ovocito-cumulus se obtendrán por punción de ovarios de faena y se madurarán in vitro en medio 199 suplementado con gonadotrofinas. Luego serán denudados y se evaluará la maduración nuclear y citoplasmática, la producción de ROS, el estatus oxidativo citosólico, las mitocondrias activas y el estado redox de los ovocitos. En las muestras de semen se evaluará la motilidad rectilínea progresiva, la viabilidad, la integridad acrosomal, la funcionalidad de la membrana plasmática (HOST), los niveles de ROS, el potencial de membrana mitocondrial y la inducción de la capacitación y la reacción acrosomal. Por último, se llevará a cabo la fecundación in vitro y los cigotos obtenidos post inseminación serán cultivados por 7-8 días, momento en el cual se evaluará el porcentaje de blastocistos obtenidos y su calidad. Se espera que la suplementación de los medios de maduración de ovocitos bovinos in vitro con resveratrol y/o trolox mejoren la calidad de los mismos al modular parámetros bioquímicos asociados al status oxidativo citosólico, estrés oxidativo, estado redox o actividad mitocondrial. De la misma manera, la estabilización espermática del semen bovino descongelado en presencia de estos antioxidantes podría mejorar los parámetros de calidad y funcionalidad espermática y regular los niveles de especies reactivas del oxígeno y el potencial de membrana mitocondrial, mejorando su capacidad fertilizante. Se espera que la mejora en la capacidad fecundante de los espermatozoides y/o de la competencia de desarrollo de los ovocitos debido a la presencia de estos antioxidantes se vea reflejada en un mayor número de embriones que lleguen al estadio de blastocisto y/o que los mismos sean de mejor calidad.