Efecto colateral de la replicación activa del HIV en astrocitos.

CEVALLOS C.; URQUIZA, JAVIER M.; OJEDA D.; SANCHEZ, LAUTARO; QUARLERI J.

Complejo Vaquerías, Valle Hermoso. Córdoba, Argentina.

Jornada; XXXVIII Reunión Científica Anual; 2018

Sociedad Argentina de Virología

El virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) es capazde infectar el parénquima cerebral, causandodesórdenes neurológicos asociados a inflamación en elsistema nervioso central (SNC), que persiste a pesar deltratamiento antirretroviral combinado. Los astrocitos,el tipo celular más abundante en el SNC juegan un rolprotagónico en la neuropatogénesis promoviendo eldaño neuronal durante las infecciones virales del SNC.Los mecanimos involucrados en la patogénesisastrocitaria permanecen inciertos. Para las infecciones de los astrocitos humanos (NHA) en cultivo se usó HIVpseudotipado expresando las proteínas del virussalvaje, la proteína fluorescente verde (GFP) y laglicoproteína G del virus de la estomatitis vesicular(pNL43-eGFP-VSV-G). La infección se monitoreómediante citometría de flujo (FACS) diferenciando encada cultivo células productivamente infectadas(PI/GFP+) de aquellas que no lo estaban (NPI/GFP-). Laevaluación del daño celular bystander implicó ensayosde cocultivo en los que se distinguieron poblacionespor FACS utilizando un colorante vital (VCP).Paralelamente se evaluó el potencial de membranamitocondrial (ΔΨm) y muerte celular(AnexinaV/7AAD). Para evaluar piroptosis celular, sesepararon mediante FACS las poblaciones celulares decada cultivo según su estado de infección. En cada unase evaluó la expresión de caspasa-1, GSDMD y NLRP3por WB. Para conocer los estímulos virales asociados ala activación de la piroptosis, se emplearon drogasantivirales (AZT, nevirapina, raltegravir e indinavir) queinhiben enzimas virales involucradas en la replicación.Las células NPI (pero no las PI) exhibieron significativodisipación del ΔΨm asociado y aumento en la muertecelular (p