Inducción de la autofagia en hepatocitos humanos por la replicación del virus de la hepatitis B de los subgenotipos F1b y F4

BARBINI L; PÉREZ PS; CAMPOS R; GONZÁLEZ LÓPEZ LEDESMA MM; ELIZALDE M; FLICHMAN D; SEVIC I; BARBINI L; CAMPOS R; PÉREZ PS; GONZÁLEZ LÓPEZ LEDESMA MM; ELIZALDE M; FLICHMAN D; SEVIC I

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

Sociedad Argentina de Virología

Introducción. El virus de la hepatitis B (HBV) causa infecciones agudas y crónicas. Se clasifica en varios subgenotipos (sgts), los cuales presentan distintas distribuciones geográficas. En Argentina los sgts nativos americanos F1b y F4 son los de mayor circulación, siendo el F1b el principal responsable de las nuevas infecciones agudas y crónicas. Además, los sgts presentan diferentes características biológicas, asociándose el sgt F1b con un curso más severo de enfermedad hepática. Entre las mutaciones de importancia clínica del HBV, las del BCP y el preCore se relacionan a la patogenia de la infección crónica.Objetivos. Analizar si la replicación del HBV de los sgts F1b y F4 induce la autofagia en hepatocitos humanos. Estudiar el efecto de las mutaciones BCP y preCore en la modulación de este proceso.Metodología. Para inducir la replicación viral, se transfectó la línea celular Huh-7 con el genoma completo lineal del HBV de sgts F1b y F4 wild type (wt), doble mutación en BCP (A1762T/G1764A) y mutación en preCore (G1896A). Se estudió la inducción de autofagia utilizando distintas técnicas: el análisis de la formación de autofagosomas detectando puntos LC3 por microscopía de fluorescencia, y la expresión de las proteínas LC3 y p62 por Western Blot.Resultados. La replicación del HBV, sgts F1b y F4, aumentó el número de células con puntos LC3 positivos, en relación a las células control. Además, indujo la conversión de LC3 citoplasmática (LC3I) a su forma asociada a los autofagosomas (LC3II). El aumento en los niveles de LC3II fue mayor en las células transfectadas con las mutantes BCP y preCore, en relación al virus wt, aunque sólo de manera significativa en las variantes de sgt F1b. Por otra parte, no se evidenciaron diferencias en la expresión de p62 entre el control y las células transfectadas con las distintas variantes virales.Conclusiones. La replicación del HBV de los sgts F1b y F4 induce la autofagia en hepatocitos humanos en cultivo. Sin embargo, de acuerdo a los resultados, también induciría un bloqueo del flujo autofágico. Estos mecanismos serían esenciales para la replicación del HBV. Las mutantes estudiadas inducirían mayores niveles de autofagia que el virus wt. Estos resultados contribuyen a describir los mecanismos moleculares de patogénesis del HBV en las infecciones crónicas, y aportan a la caracterización biológica del genotipo F, autóctono latinoamericano, responsable de la mayoría de las hepatitis crónicas B en nuestra región.