Análisis de la diferencia de fitness entre los subgenotipos F1b y F4 y entre las poblaciones mutadas de subgenotipo D1

SPERONI M; SEVIC I; CAMPOS R; ELIZALDE M; FLICHMAN D.; GONZÁLEZ LÓPEZ LEDESMA MM

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

Sociedad Argentina de Virología

El HBV presenta una alta tasa de mutación y como consecuencia el virus circula como una población de variantes genéticas que evolucionan a lo largo de la infección. La evolución de la población viral, ya sea en la infección en un mismo paciente o en una población de individuos, muestra un complejo equilibrio que depende de factores tanto virales como del hospedador. Como resultado del proceso evolutivo, se establece aquella subpoblación viral (mutante a nivel intrahospedador o subgenotipo (sgt) a nivel interhospedador) que presente el mayor fitness. En el caso de la evolución interhospedador (ocupación del nicho ecológico) decidimos estudiar los subgenotipos circulantes en Argentina, mientras que en el caso de la evolución intrahospedador decidimos estudiar las mutantes emergentes en la infección crónica. En trabajos previos, de ocupación de nicho ecológico, los resultados mostraron que el sgtF1b desplazó claramente al sgtF4. Además, en experimentos de evaluación de fitness de las mutantes, hemos observado que sgtD1 con deleción en la posición 1763-1770 (sgtD1del) presentó significativamente menor fitness que el sgtD1 cepa salvaje (sgtD1cs) y el sgtD1 mutante G1896A (sgtD1mut). En este trabajo, para analizar más profundamente esta diferencia, evaluamos la síntesis de intermediarios de ADN por Southern blotting, niveles de ADN extracelular por qPCR y la síntesis de antígeno e y antígeno s. Los resultados de los experimentos F1b-F4 muestran que sgtF1b tiene niveles de ADN intracelular y extracelular más altos que sgtF4, mientras que el sgtF4 expresa más antígeno e comparando con sgtF1b. Considerando que los dos, ARN pre-genómico y mARN pre-core (precursor de HBeAg), se transcriben del ORF pre-C/C y que la expresión de los dos está regulada por el mismo promotor, este resultado podría sugerir que una de las diferencias intrínsecas entre estos dos subgenotipos es la regulación de la síntesis de estos dos ARNs. Mientras que sgtF4 favorecería la síntesis de HBeAg, sgtF1b la síntesis del pre-genoma. Esta preferencia en la síntesis de genoma podría ser una de las explicaciones de porque el sgtF1b está ocupando el nicho ecológico de las nuevas infecciones. Los resultados de los experimentos con las mutantes muestran que sgtD1del tiene menores niveles de ADN extracelular e intracelular comparando con sgtD1cs y sgtD1mut. Adicionalmente, sgtD1del cuando está en la mezcla con sgtD1cs tiene niveles de ADN intracelular y extracelular similares a sgtD1cs, mientras que cuando está en la mezcla con sgtD1mut tiene los niveles de ADN intracelular y extracelular similares a sgtD1del. Este comportamiento podría ser una evidencia de que las variantes virales no tienen el mismo comportamiento cuando están transfectadas juntos o por separado, destacando así la importancia de las co-transfecciones en los experimentos de evaluación de fitness.