EL SEMEN POTENCIA LA MEMORIA INMUNOLÓGICA EN LA RESPUESTA CONTRA HSV-2

A. VARESE; F. REMES LENICOV; G. ERNST; A. MERLOTTI; P. PEREYRA GERBER; G. DUETTE; E. DANTAS; F. ERRA DÍAZ; J. RUBIONE; J. GEFFNER; A. CEBALLOS

Buenos Aires

Congreso; Congreso Argentino de Virología; 2015

Sociedad Argentina de Virología

El semen es el principal vector de una amplia gama de enfermedades de transmisión sexual. Además, es capaz de inducir acciones inmunosupresoras que favorecen la tolerancia alo-reactiva a antígenos paternos, evitando el rechazo fetal luego de la implantación. Nuestra hipótesis es que el semen, más allá de ser un vehículo de agentes infecciosos, tiene la capacidad de modular la respuesta inmune contra patógenos de transmisión sexual. Con el objetivo de evaluar la modulación de la respuesta inmune femenina frente a un agente infeccioso, ensayamos un modelo murino de vacunación intravaginal de HSV-2. Hembras Balb/c fueron vacunadas con HSV-2 inactivado (1x104 UFP) por vía intravaginal en presencia o ausencia del fluido que contienen las vesículas seminales (VS), extraído de machos singeneicos. Un mes después fueron desafiadas por la misma vía con una dosis letal de HSV-2 (3x106 UFP). La producción viral se evaluó en la mucosa vaginal por inmunohistoquímica. Tanto en lavados vaginales, como en células recuperadas de ganglios ilíacos y mucosa genital se evaluó la producción de citoquinas por ELISA, y el número de células productoras de IFN-γ por ELISpot. La expresión de IFN-α, IFN-β, TGF-β, IL-10, FOXP3, CCL2, CCL5, CXCL9 y CXCL10 se midió por RT-qPCR. Se evaluó la expresión de CD3, CD8, CD4, CD11c, y DX5 (NK), y la medida de proliferación celular (pérdida de CFSE) por citometría de flujo. Los títulos de IgG e IgA en fluidos vaginales e IgG en suero se cuantificaron por ELISA. Los ratones vacunados en presencia de VS mostraron una supervivencia del 90% vs 10% en el grupo control (n=20 p<0,001), y un menor progreso de la enfermedad (n=20 p<0,001). En el sitio de infección se observó una mayor proporción de células T CD8+, y un aumento de IFN-γ en lavados vaginales al día 3 post-desafío (pd) (n=20 p<0,01). Siete días pd observamos un aumento significativo en la producción de IFN-γ, TNF-α, IL-6 e IL-17A, acompañado por una disminución de IL-10 en la mucosa vaginal (n=20 p<0,01).En los ganglios drenantes, 3 días pd, observamos aumentada la expresión de CXCL9 (n=10 p<0,001), mayor número de células por ganglio, e incrementada la proporción de células T CD8+ (n=10 p<0,05). Observamos, además, que las células T CD4+ y T CD8+ presentaron mayor capacidad proliferativa (n=10 MFI 23.727 vs 17.200; p<0,01) y un aumento en la producción de IFN-γ (n=10 p<0,05) frente estímulos específicos. No observamos diferencias significativas en el título de IgG e IgA. Por otro lado, evaluamos la respuesta inmune a tiempos tempranos post-vacunación (48 hs), observando que el grupo VS presentó ganglios drenantes de mayor peso y un aumento en la producción de IFN-γ e IL-6 (n=10 p<0,001); y observamos un aumento en el número de células NK en la mucosa vaginal. Nuestros resultados sugieren que la presencia de VS durante la vacunación promueve una respuesta inflamatoria temprana, potenciando la subsecuente respuesta T específica de memoria contra HSV-2, y la protección mediada por IFN-γ.