DELECIÓN DE GENES INMUNOMODULADORES DEL GENOMA DE MVA: EFECTO SOBRE SU INMUNOGENICIDAD

MP HOLGADO; CA MAETO; J FALIVENE; MP DEL MÉDICO-ZACAJ; CALAMANTE GABRIELA; GHERARDI MAGDALENA

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología; 2015

El virus Vaccinia Ankara Modificado (MVA) aún conserva genes relacionados con la evasión de la respuesta inmune del huésped.Previamente, nuestro grupo reportó la optimización del potencial vacunal de este vector al cual se le había delecionado el genC12L, que codifica para una proteína de unión a IL-18. En este trabajo analizamos la inmunogenicidad del vector MVA luego de ladeleción dos genes virales: el A44L, implicado en la síntesis de hormonas esteroideas, y el A46R, que inhibe la señalización dereceptores Toll (MVAΔA44L-A46R: MVAd). Como así también el análisis de las tres deleciones en simultáneo (MVAΔC12L/ΔA44L-A46R: MVAt).Para ello, ratones C57BL/6 fueron inmunizados por vía intramuscular con el virus salvaje (MVAwt) o los virus delecionados(ΔMVAs). Evaluamos la respuesta celular T frente a epitopes del virus Vaccinia a los 7 y 45 días post-inmunización (dpi),correspondientes a las etapas de respuesta aguda y de memoria, respectivamente, en bazo y ganglios ilíacos. La proporción decélulas productoras de IFNγ e IL-2 se evaluó mediante ELISPOT y la producción de citoquinas a través de ELISA. El porcentaje decélulas T-CD8 citotóxicas se analizó por citometría de flujo, mediante la expresión de CD107, y la proliferación específica de lasdistintas subpoblaciones de células T de memoria mediante marcación con CFSE y la expresión de CD44 y CD62L. Para estudiar larespuesta innata inducida por el virus, se inmunizaron ratones con el MVAwt y el MVAt, y se evaluó por ELISA el patrón decitoquinas producido entre las 0 y 30 horas post-inoculación (hpi).A los 7 dpi, los ΔMVAs indujeron un aumento significativo en el número de T-CD8 y CD4 productoras de IFNγ específicas contraVaccinia en comparación al MVAwt, como así también en el número de T-CD8 productoras de IL-2. Este incremento, también seobservó a los 45 dpi. El porcentaje de T-CD8 de memoria que proliferó luego de la estimulación fue mayor en el grupo inmunizadocon MVAt (6%) que en el MVAwt (3%), obteniéndose resultados similares en la población T-CD4 (7% vs 1% respectivamente).Dentro de las células que proliferaron, el MVAt indujo una mayor proporción de células de memoria central (TCM: 37%) y dememoria efectora (TEM: 25%) versus el MVAwt (TCM: 20%,TEM: 11%). Resultados similares se obtuvieron para la población T-CD4 (TCM: 37%,TEM: 16% vs TCM: 8%,TEM: 2% respectivamente). Sumado a esto, los ∆MVAs indujeron mayor porcentaje de T-CD8 específicas bifuncionales productoras de IFNγ y con capacidad citotóxica. Al analizar la respuesta innata observamos que elMVAt produjo mayores niveles de IFNγ e IL-12 a las 20 y 30 hpi en comparación al MVAwt.La deleción simultánea de genes específicos del genoma de MVA, cuyas funciones se encuentran inter-relacionadas, compone unaestrategia apropiada para aumentar el potencial vacunal de este vector, creando una herramienta útil y versátil, para ser utilizada enel desarrollo de vacunas frente a infecciones tales como HIV, Malaria y Tuberculosis