LA INFECCIÓN DE ASTROCITOS POR TRYPANOSOMA CRUZI ES CITOPROTECTORA Y DISMINUYE LA MUERTE BYSTANDER EN LA CO-INFECCIÓN POR HIV

JAVIER URQUIZA, DIEGO OJEDA, MARÍA SUSANA LEGUIZAMÓN, JUAN BURGOS, JORGE QUARLERI

Congreso; Congreso Argentino de Infectología SADI 2015; 2015

SADI

Trabajo seleccionado para Comunicación Oral Introducción: La meningoencefalitis chagásica puede desarrollarse en pacientes coinfectados donde la infección por HIV favorece la reactivación de la infección por T.cruzi (Tc).La coinfecciónHIV-Tc puede producirse en células de la astroglia del sistema nervioso central, desconociéndose su efecto sobre las mismas y las células vecinas (bystander) Objetivo: Evaluar in vitro el impacto de las infecciones únicas y co-infecciones (HIV-Tc) sobre la muerte celular de astrocitos humanos. Materiales y Métodos: Astrocitos humanos (U373) mantenidos en cultivo (DMEM+SFB, 37º C, 5% de CO2) fueron infectados con tripomastigotes de Tc (cepa CL) (proporción célula:parásito 1:10). Luego de 24 hs, se infectaron con un clon de HIV (pNL43)-psedotipeado con virus de la estomatitis vesicular (VSV) y marcado con una proteína fluorescente verde (GFP). Como controles se incluyeron astrocitos (i) sin infectar, (ii) mono-infectados por Tc, y (iii) por HIV. Tras 72 hs, se evaluó por citometría de flujo la eficiencia de infección por HIV, y el nivel de muerte celular (NMC) por apoptosis/necrosis celular (tinción con anexina-V (AV) y7AAD). La apoptosis (A), la necrosis (N) y apoptosis tardía (AT), en los diferentes escenarios (sobre-infección e infecciones únicas) se analizaron según: AV+ /7-AAD- (A), AV-/7AAD+ (N) y AV+/7AAD+ (AT). Estos parámetros se evaluaron diferencialmente en cada cultivo tanto en células infectadas por HIV (GFP+), como en células ?vecinas? no infectadas por HIV (GFP-). Los valores son relativos (%) y se expresan como media±DS. El análisis estadístico se realizó por el test T Student y valores de p0.05) como infección única (87,7±0,5), o ante la coinfección con Tc (81,2±8,0). Los NMC por apoptosis (A), apoptosis tardía (AT) y necrosis (N) en los astrocitos sólo infectados por Tc (A:1,7±0,0; AT:0,6±0.0; N:0,8±0,1) fueron significativamente menores comparado con células: i) HIV+ (A: 6,4±1,0; AT: 1,9±0,7; N: 2,3±0,4); ii) HIV- de cultivos HIV+(A: 17,7±7,6; AT: 22,4±3,8; N: 15,7±1,5); y iii) HIV- de cultivos Tc-HIV(A: 14,7±6,9; AT:8,8±1,1; N:6,4±1,8). El NMC fue: (a) ligeramente mayor luego de infección única por HIV respecto de aquellas coinfectadas HIV/Tc (p=0.07) para las células HIV+. (b) significativamente menor en células HIV+ respecto de las HIV- (vecinas) en estos dos escenarios (sólo HIV, p=0.00002; HIV/Tc, p=0.001). (c) significativamente menor luego de la coinfección Tc/HIV respecto de la infección única por HIV (p=0.006), en las células vecinas (HIV-). El máximo NMC fue hallado en astrocitos HIV- luego de infección única con HIV (44,1%±9,8). Conclusiones: La infección de astrocitos por Tc conduce a un marcado efecto citoprotector per se, capaz de disminuir el efecto bystander del HIV ante la coinfección. En modo semejante, la infección productiva por HIV ?única o en el contexto de la coinfección con Tc- disminuye la muerte celular. Estas interacciones de HIV y Tc con los astrocitos pueden alterar los mecanismos de daño celular contribuyendo a su parasitismo intracelular por períodos prolongados.