Desarrollo de un nuevo inmunoensayo basado en glicoconjugados recombinantes para el diagnóstico de brucelosis humana

CIOCCHINI AE; REY SERANTES DA; MELLI LJ; IWASHKIW J; DEODATO B; WALLACH J; FELDMAN MF; UGALDE JE ; COMERCI D. J

Cordoba

Congreso; XI CONGRESO ARGENTINO DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE INFECTOLOGÍA (SADI 2012); 2012

Sociedad Argentina de Infectología

Los estudios de laboratorio son esenciales para el diagnóstico de la brucelosis humana. Sin embargo, la mayoría de las herramientas de diagnóstico disponibles hasta el momento son de difícil implementación en regiones o países donde la brucelosis es endémica. Como una posible solución a este problema, se desarrolló un inmunoensayo rápido y simple para la detección de anticuerpos anti el polisacárido-O del LPS de brucella spp. basado en la utilización de un novedoso antígeno acoplado a partículas magnéticas. Mediante ingeniería genética, se generó un glicoconjugado recombinante en la que su fracción sacarídica corresponde al polisacárido-O de brucella spp. Las micropartículas magnéticas fueron funcionalizadas con el antígeno y enfrentadas con las muestras de sueros. Los inmunocomplejos se detectaron utilizando anticuerpos anti-IgM/G humana conjugados con el fluoróforo Cy5 y cuantificados en un espectrofluorómetro. Para evaluar la utilidad del ensayo para el diagnóstico de brucelosis humana se analizaron muestras de suero de: i) individuos sanos donantes, ii) pacientes con hemocultivo positivo para brucella spp., iii) pacientes con serología positiva para brucella y diagnóstico clínico de brucelosis, iv) individuos sanos expuestos al patógeno, y v) pacientes sin brucelosis pero con otras patologías infecciosas. Para determinar la capacidad diagnóstica del nuevo test, se compararon los valores con los obtenidos en los test clásicos como RB, BPA, SAT (Huddleson), TAT (Wright), TAT-2ME, CELISA, y FC. Los resultados obtenidos demuestran que este inmunoensayo permite diferenciar claramente entre individuos sanos y pacientes con brucelosis por b. abortus, b. melitensis y b. suis, no observándose reactividad cruzada con muestras provenientes de individuos con otras patologías infecciosas. CONCLUSIONES: Proponemos utilizar esta tecnología para el desarrollo de un inmunoensayo del tipo ?Point Of Care? robusto, rápido y económico para el diagnóstico de brucelosis humana. El uso de glicoconjugados recombinantes puede ser extendido al desarrollo de inmunodiagnósticos para otras enfermedades infecciosas de importancia médica.