Extracts from Nicotiana glauca induce apoptosis through caspases in skeletal muscle cells

MUSSO, FLORENCIA; LINCOR, DARÍO; VASCONSUELO, ANDREA; MILANESI, LORENA; FARAONI, M.BELÉN

Potrero de los Funes-San Luis

Simposio; XXI Simposio Nacional de Química Orgánica; 2017

Sociedad Argentina de Investigación en Química Orgánica

APOPTOSIS EN CÉLULAS MUSCULARES ESQUELÉTICAS INDUCIDA POR EXTRACTOS LIPÍDICOS DE NICOTIANA GLAUCAFlorencia Musso1, Darío Lincor2, Andrea Vasconsuelo2, Lorena Milanesi2 y M. Belén Faraoni11 INQUISUR (CONICET-UNS), Universidad Nacional del Sur, 8000, Bahía Blanca, Argentina. 2 INBIOSUR (CONICET-UNS), Universidad Nacional del Sur, 8000, Bahía Blanca, Argentina, florencia.musso@uns.edu.arNicotiana glauca, fitoestrógenos, apoptosisLas plantas son verdaderas fábricas químicas por ser fuente de metabolitos secundarios farmacológicamente activos, llamados fitoquímicos. Un alto porcentaje de estos compuestos son usados en medicamentos para diversas terapias, pero generalmente se los utiliza sin el conocimiento de sus efectos secundarios, ni de los mecanismos moleculares que se activan en células mamíferas. Se sabe que la familia Solanaceae contiene cantidades significativas de fitoestrógenos, y que los mismos se encuentran en los extractos lipídicos de sus especies. Se observó que estos compuestos tienen similitudes estructurales con el 17β-estradiol de mamíferos (E2) y son capaces de unirse a los receptores de estrógenos (ERs), presentes en el tejido muscular esquelético1. Por este motivo se ha generado un interés considerable en el uso de estas especies vegetales como alternativa para la terapia de reemplazo hormonal (TRH), carcinogénesis, aterosclerosis y osteoporosis, debido a sus acciones preventivas o terapéuticas2. Por lo tanto, se propuso en este trabajo investigar los efectos de los extractos de Nicotiana glauca sobre células musculares esqueléticas murinas (línea celular C2C12).En primer lugar, se obtuvo el extracto etanólico de N. glauca con el cual se trataron las células. Se observó a nivel celular morfología clásica de apoptosis, utilizando un microscopio de fluorescencia invertido NIKON Eclipse Ti-S: (condensación/picnosis nuclear (mediante tinción de ácidos nucleicos con DAPI) y reordenamiento mitocondrial (mediante tinción de mitocondrias con MItotracker Red), entre otros) y a nivel molecular, la activación de caspasas por clivaje del sustrato específico para caspasas 3/7 marcado con fluoróforo y fragmentación de ADN mediante ensayo de TUNEL. Posteriormente, se fraccionó el extracto crudo con solventes de polaridad creciente: hexano, cloroformo y acetato de etilo, dando lugar a tres sub-extractos con los cuales se trataron nuevas células musculares. Se evidenció similar respuesta que con el extracto crudo, presentando el sub-extracto hexánico mayor capacidad para inducir apoptosis.Dado que los ensayos se realizaron sobre mioblastos, células regeneradoras de músculo, los efectos observados de los extractos lipídicos de N. glauca sugieren que el uso medicinal de esta planta podría afectar la homeostasis del músculo esquelético.La investigación futura está orientada a caracterizar los compuestos responsables de la apoptosis para evitar efectos indeseables, separándolos de los correspondientes sub-extractos. Asimismo, dichos compuestos tendrían un potencial terapéutico en trastornos hiperproliferativos como el cáncer, donde se desea la muerte controlada de las células hiperproliferativas.