Variabilidad genética por SSCP de esporas y suelos con hongos micorrícicos nativos de la provincia de Buenos Aires

THOUGNON ISLAS, ANDREA J.; HERNANDEZ GUIJARRO, KEREN; COVACEVICH, FERNANDA

Mar del Plata

Encuentro; VIII Encuentro de Biologos en Red; 2013

VIII BER 2013

Se determinó la variabilidad genética de hongos micorrícico arbusculares (HMA) por Single Stranded Conformation Polymorphism (SSCP) a partir de suelos y de esporas de HMA. Se realizó la extracción de ADN (kit ZR Soil Microbe DNA MiniPrepTM) a partir de muestras de suelo de siete sitios con aptitud agrícola de la provincia de Buenos Aires, cada uno bajo manejo contrastante (prístino y agrícola). Paralelamente se realizó la extracción de ADN de esporas de HMA provenientes de cultivos trampa de multiplicación (ryegrass, 12 semanas de multiplicación) de los suelos indicados. La extracción de esporas se realizó utilizando el mismo kit de extracción de suelo modificado, utilizando como muestra esporas maceradas en el primer buffer de extracción del protocolo. El ADN extraído se utilizó como molde en reacciones de PCR utilizando la estrategia de PCR anidada empleando cebadores que amplifican parte de la región 28S ADNr de representantes del género Glomus (Funneliformis mosseae =Glomus mosseae; Glomus caledonium y Glomus geosporum). Se obtuvieron amplificaciones positivas y de tamaño esperado tanto para las muestras extraídas a partir de suelo como de esporas, siendo ésto un indicativo del éxito de la modificación del protocolo de extracción de ADN. Se realizaron geles no desnaturalizantes de SSCP (0,5X MDE Cambrex, Rockland ME, USA) con los productos de la reaccion de PCR (5 µL amplificado, con 4 mL de loading buffer, desnaturalización 5 min a 95 ºC y mantenidos en hielo hasta su siembra).  Luego de la corrida electroforética (5 W, 4000 V, 200 mA, 3,5 horas, 10ºC) las bandas fueron visualizadas por tinción del gel con plata. Se evidenciaron patrones con bandas que oscilaron de 15-45 bandas/muestra. En algunos sitios y condiciones la mayor cantidad de bandas (indicativo de mayor variabilidad de HMA) se evidenció para las muestras extraídas a partir de suelo mientras que en otros sitios a partir de esporas. Es probable que un período de multiplicación de esporas superior a 12 semanas hubiera favorecido mayor multiplicación y diversidad de HMA. La modificación propuesta en el kit de extracción podría aumentar la representatividad en estudios destinados a determinar la variabilidad genética de los HMA.