ESTUDIO DE LA METILACIÓN DE LA HISTONA H3 EN EL PROCESO DE CRECIMIENTO Y ENQUISTAMIENTO DEL PARÁSITO Giardia lamblia

DIAZ-PEREZ LUCIANO; PATOLSKY ROCIO; TOUZ, MARÍA CAROLINA; RÓPOLO, ANDREA

Jornada; XXVJornadas Científicas de la Sociedad de Biología de Cordoba; 2022

Giardia lamblia es un protozoario que tapiza la mucosa del duodeno de animales vertebrados y que causa la enfermedad conocidacomo giardiasis. Su ciclo de vida es simple y se caracteriza por presentar dos estadíos: el trofozoíto, que coloniza el intestino delgadoy es responsable del cuadro clínico, y el quiste, que constituye la forma de resistencia y es eliminado en las heces del hospedador. Ladeprivación de colesterol y un leve aumento del pH en los primeros segmentos del intestino grueso son los estímulos necesarios paraque el trofozoíto dispare la respuesta que induce su enquistamiento. En los últimos años la regulación epigénetica del ciclo de vidaparasitario ha cobrado relevancia debido a la baja homología de las proteínas efectoras de esta regulación con respecto a las análogashumanas. En este sentido, analizar y caracterizar su función resulta clave para encontrar nuevos targets terapéuticos. Nuestro grupo seha centrado en el estudio de la Histona Metil-Transferasa (GLHMT2) y de metilaciones en el dominio N-terminal de la histona H3mediante el uso de anticuerpos comerciales, tanto en crecimiento como en enquistamiento. Para describir qué participación tiene laGLHMT2 durante ambas etapas vitales del protozoo es que se generaron dos poblaciones celulares: por un lado, células que sobreexpresande manera estable a través de un plásmido la proteína, glhmt2-ha, y por otro, células que sobre-expresan de la misma manerala secuencia antisentido del ARNm correspondiente a HMT2, glhmt2-as. Es así que se realizaron curvas de crecimiento y deenquistamiento y se contrastaron con células de tipo salvaje como control. De esta manera, observamos que la sobre-expresión y elsilenciamiento de GlHMT2 estarían influenciando de manera negativa ambas etapas vitales del parásito. Con el objetivo de analizar lasmarcas de metilación es que se realizaron inmunofluorescencias indirectas en células salvajes con anticuerpos primarios comercialesdirigidos contra dichas marcas. Observamos que anticuerpos dirigidos contra marcas de mono, di y trimetilación de H3K4 producenuna clara marca nuclear durante el crecimiento y que hacia la fase final del enquistamiento la marca es también citoplasmática. Además,en cuanto a la metilación de H3K9 durante el crecimiento, pudimos observar que la dimetilación presenta un patrón nuclear ycitoplasmático. En cambio, la trimetilación de la misma lisina, presenta también un patrón citosólico, pero a nivel nuclear se observaen spots. Finalmente, al examinar la lisina 36 (37 en G. lamblia) pudimos apreciar que tanto la di como la trimetilación presentanlocalización nuclear y citosólica durante la fase de crecimiento del microorganismo. Estos resultados abren nuevos interrogantes acercade la regulación epigenética del ciclo de vida parasitario, pero sobre todo en relación al rol que la metilación de lisinas de histonas enparticular cumple en ambos estadíos de vida de Giardia lamblia.