Apoptosis Asociada a la Expresión del Intercambiador Na +/H+ en Obstrucción Renal Neonatal

WALTER MANUCHA; LILIANA CARRIZO; CELESTE RUETE; PATRICIA G. VALLES

Facultad de Ciencias Médicas U. N. de Cuyo - Mendoza - Argentina

Jornada; VIII Jornadas de Investigación; 2005

Secretaría de Ciencia y Técnica Facultad de Medicina U. N. de Cuyo

El riñón obstruido durante la obstrucción ureteral unilateral (OUU) sufre atrofia y pérdida de masa, mediado por apoptosis con supresión de la proliferación celular y reducción del ADN. Los eventos moleculares envueltos en la regulación de la apoptósis no están completamente dilucidados. No obstante, se han postulado factores como la injuria mecánica, Angiotensina II, TNF, estrés oxidativo y óxido nítrico entre otros, que participarían en la activación de la cascada apoptótica. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la participación de NHE1 en la inducción a la apoptosis, en un modelo experimental de incremento de presión hidrostática intraluminal OUU neonatal. A las 48 horas de nacidas, ratas Wistar (n=10) de 9±0,5 g., fueron sometidas a cirugía consistente en la obstrucción del uréter izquierdo. Luego de 5 y 14 días, se procedió respectivamente a la nefrectomía bilateral para: l-estudio de inmunohistoquímica a fin de realizar la identificación de apoptosis celular (TUNEL) 2-Morfometría: Evaluación de la fibrosis intersticial (Masson). 3-Expresión del ARNm de AT1, AT2, NHE1, ONSi yTGF (RT-PCR). 4-Western Blot para NHE1. La expresión de ARNm del receptor AT2 de Angiotensina II disminuyó luego de 14 días de obstrucción en corteza control CC y corteza obstruida CO respecto a los 5 días; 497±2 y 566±3 vs. 993±5 y 974±3 (p<0.01). Demostramos disminución de la expresión del receptor ATl de angiotensina II en CO por 14 días respecto a CC 517±2 vs. 880±3 (p<0.01). La expresión del ARNm de NHE1 no mostró diferencias en CO respecto a CC luego de 5 días de obstrucción 830±9 vs. 921±7. Además, demostramos descenso significativo de la expresión del ARNm de NHE1 en CO de 14 días respecto a su control 652±9 vs. 895±7 (p<0.05), con disminución de los niveles de proteína de NHE1 en CO. Simultáneamente demostramos en CO por 14 días intensa inducción de células apoptóticas en células epiteliales de túbulos contorneados proximales (PT), colectores corticales (CCD), con presencia de células apoptóticas intersticiales. La cuantificación de células apoptóticas (%) demostró un marcado incremento luego de 14 días de obstrucción respecto al control 6±0,3 vs. 0,75±0,1 (p<0.001). Por el contrario, demostramos mínima apoptosis en células epiteliales de PT y CCD a los 5 días de obstrucción 0,38±0,05 vs. 1,1l±0,1 (p<0.05). El estudio morfométrico no mostró cambios en CO respecto a CC. Conclusión: La disminución de la expresión de ARNm y proteína del intercambiador NHE1 en presencia de una marcada respuesta apoptótica .nos permite sugerir la contribución de este intercambiador al proceso de acidificación apoptótica.