Aislamiento e identificación de una proteína receptora de Caltrin en espermatozoides de la porción cauda de epidídimo de rata

RIVADENEIRA ANDREA G.; MIRANDA SABRINA; MONTI MARIELA R.; NOVELLA M.L.; ARGARAÑA CARLOS E.; CORONEL CARLOS E.

Mar del Plata

Congreso; Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2012

La proteína caltrin (caltrin transport inhibitor) de la secreción de vesícula seminal de rata se une específicamente a la región acrosomal de la cabeza de los espermatozoides durante la eyaculación. De este modo, inhibe la incorporación de calcio extracelular y previene la exocitosis acrosomal espontánea durante el transito de los espermatozoides por el tracto reproductor de la hembra. A fin de estudiar la unión de caltrin (6.2 kDa) a la región acrosomal, se investigó la presencia de moléculas receptoras en los espermatozoides de la porción cauda de epidídimo mediante la unión covalente caltrin-receptor por "crosslinking" con NHS y EDC. La presencia del complejo se analizó por Western blotting con anticuerpos anti-caltrin, los que revelaron una banda de 55 kDa sugiriendo la existencia de una molécula receptora de ~49 kDa. Para aislar dicha molécula, las proteínas de la superficie de los espermatozoides se extrajeron con Triton X-100 y se sometieron a cromatografía de afinidad en una columna de Chitina en la que se inmovilizó la proteína recombinante caltrin-inteina expresada en E. coli. Las proteínas retenidas se eluyeron con NaCl 1 M y se analizaron por SDS-PAGE y MALDI TOF/MS. Se detectó una banda de 48 kDa la que se identificó como HongrES 1, una proteína del epitelio secretor de la porción cauda de epidídimo de rata que se une a la cabeza de los espermatozoides durante el tránsito por ese segmento del órgano. Ya que los espermatozoides de caput y corpus de epidídimo carecen de HongrES 1 en sus cabezas, se evaluó la capacidad de caltrin para unirse a ellos en forma comparativa con espermatozoides de la porción cauda. La inmunofluorescencia indirecta mostró que caltrin se une sólo a los espermatozoides de cauda pero no a los provenientes de otros segmentos del epidídimo. Estos datos reafirman la hipótesis de que HongrES 1 unida a los espermatozoides actuaría como molécula receptora de la proteína caltrin en la rata.