Biodegradación de 2,4-dinitrotolueno: construcción de una cepa de P. fluorescens capaz de biodegradar 4-metil-5-nitrocatecol

MONTI MARIELA R.; SMANIA ANDREA M.; ARGARAÑA CARLOS E.

Viña del Mar-Chile

Congreso; XXXVI Reunión Anual de SAIB; 2000

Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular

El 2,4-DNT forma parte de efluentes industriales provenientes de la síntesis de toluendiisocianato (TDI). Un proceso biodegradativo constituye una alternativa de innovación para su eliminación con respecto a los métodos actuales. La vía oxidativa de Burkholderia cepacia DNT para mineralizar 2,4-DNT es la mejor caracterizada: una dioxigenasa (dntA) transforma el 2,4-DNT en 4-metil-5-nitrocatecol (MNC); seguidamente una monooxigenasa (dntB) y una reductasa inespecífica producen trihidroxitolueno (THT). Finalmente, una oxigenasa (dntD) abre el anillo aromático. La utilización de B. cepacea en bioprocesos constituye una desventaja por su caracterización como fitopatógena y patógena oportunista en humanos. El objetivo del presente trabajo es la construcción de una bacteria con capacidad de biodegradar 2,4-DNT, para lo cual se transfirieron los genes de B. cepacea a una cepa de P. fluorescens, especie bacteriana con características de inocuidad y capacidad de adaptación a diversas condiciones ambientales. En primer lugar, se realizó la transferencia en conjunto de los genes dntB y dntD al cromosoma de P. fluorescens mediante eventos de conjugación/transposición utilizando el plásmido pUT-miniTn5 Km. La inserción fue confirmada por PCR así como por ensayos de actividad "in vivo" de ambas enzimas. Se llevaron a cabo distintos estudios analíticos para determinar y caracterizar la capacidad de biodegradar el MNC y THT. Actualmente se trabaja en la transferencia del gen dntA para obtener la cepa P. fluorescens con capacidad de mineralizar 2,4-DNT.