REGULACION DEL pH INTRACELULAR Y DEL MOVIMIENTO DE AGUA POR EL INTERCAMBIADOR Cl-/HCO3- EN LA LÍNEA CELULAR RCCD1

RIVAROLA VALERIA; FORD PAULA; CHARA OSVALDO; PARISI MARIO; CAPURRO CLAUDIA

Tafí del Valle, Tucumán, Argentina

Congreso; Reunión Anual de la SAB; 2001

Sociedad Argentina de Biofísica

El túbulo colector cortical del riñón de mamíferos juega un rol muy importante en el control de la reabsorción y secreción de electrolitos y agua. El mismo es un epitelio formado por dos tipos celulares: las células principales y las intercalares. Se ha propuesto que las células principales regularían la reabsorción de agua y Na+ mientras que las células intercalares funcionarían regulando el pH, el transporte de HCO3-. Nuestros estudios previos mostraron que la línea celular de túbulo colector cortical de rata (RCCD1) presenta una secreción de agua asociada a Cl- y HCO3-. Uno de los transportadores involucrados en el control del pH intracelular (pHi) es el intercambiador Cl-/HCO3- relacionado con la banda 3 eritrocitaria (AE). Existen 3 isoformas de este transportador clonadas hasta el momento en rata: AE1, AE2 y AE3, cuya ubicación subcelular es controvertida. El objetivo de este trabajo fue caracterizar la participación del intercambiador Cl-/HCO3- en la regulación del pH intracelular (pHi) y del movimiento de agua en la línea celular RCCD1. El pHi se midió utilizando el fluorósforo BCECF sobre monocapas de células RCCD1 cultivadas sobre soportes permeables. El flujo de agua transepitelial (Jw) se midió utilizando un dispositivo desarrollado en el laboratorio. Se realizaron estudios de RT-PCR utilizando oligos específicos para detectar la posible expresión de los ARNm de las isoformas renales AE1 y AE2. La remoción apical y basolateral de Cl- aumentó gradual y significativamente el pHi de manera reversible (D pHi = 0,2 ± 0,05, n=4, p<0,05). Esta alcalinización fue sensible a DIDS 100 m M (inhibidor del intercambiador Cl-/HCO3-). Por otra parte la sustitución del HCO3- produjo una alcalinización transitoria (D pHi = 0,27 ± 0,03, n=7, p<0,001) y sensible a DIDS en un 43%. La acetazolamida 100 m M (inhibidor de la anhidrasa carbónica; enzima que convierte el CO2 en HCO3-) inhibió la cinética de acidificación en un 100%, indicando que este efecto se debe a una salida de HCO3-. Por otra parte, la sustitución de Cl- basolateral indujo una alcalinización similar a la observada al reemplazar el Cl- de ambos lados (D pHi-basolat= 0,22 ± 0,03, n=5, p<0,001). Por otra parte, la sustitución del Cl- del lado apical no induce esta respuesta. Estos resultados funcionales sugieren la expresión de un transportador Cl-/HCO3- en la membrana basolateral de las células RCCD1. Con el fin de determinar si el transportador Cl-/HCO3- estaría asociado al transporte de agua se realizaron experimentos de medición del Jw y de pHi. La sustitución del Cl- y HCO3- indujo una disminución de un 54% en la secreción basal de agua y un aumento del pHi (D pHi= 0.20 ± 0.07, n=6, p<0.01). Esto sugiere la dependencia del ambos iones en la secreción de agua. Finalmente para determinar que isoformas del transportador Cl-/HCO3- se expresarían en la línea celular RCCD1 se realizaron experimentos de RT-PCR que demostraron la expresión de la isoforma AE2. Estos resultados mostrarían en la línea celular RCCD1 la presencia de al menos una isoforma (AE2) del transportador Cl-/HCO3- cuya ubicación sería basolateral. Además, los resultados funcionales muestran que existiría una vinculación entre el transporte de agua y el pHi, probablemente asociados al transportador Cl-/HCO3-.