CARACTERIZACIÓN BIOFÍSICA DEL TRANSPORTE DE AGUA EN UNA LINEA CELULAR DE TUBULO COLECTOR CORTICAL RENAL (RCCD1).

CHARA OSVALDO; RIVAROLA VALERIA; FORD PAULA; DORR RICARDO; PARISI MARIO; CAPURRO CLAUDIA

Tafí del Valle, Tucumán, Argentina

Congreso; Reunión Anual de la SAB; 2001

Sociedad Argentina de Biofísica (SAB)

Si bien muchos estudios han sido realizados para tratar de entender las bases biofísicas y moleculares del transporte de fluido renal, muchos puntos importantes no están aún aclarados. Actualmente se acepta que el movimiento neto de agua, a través de un epitelio, es la resultante de una interacción compleja entre los flujos inducidos por gradientes osmóticos (D P ) e hidrostátícos (D P) y aquellos asociados a los transportes tónicos. Estos movimientos de agua pueden efectuarse tanto a través de las células epiteliales (vía transcelular), como entre las células (vía paracelular), En lo que respecta al pasaje transcelular, este puede ocurrir o bien a través de la bicapa lipídica o bien por canales específicos para el agua llamados acuaporinas (AQPs). El clonado de AQPs representó un salto cualitativo fundamental en nuestra comprensión de los mecanismos de permeabilidad al agua. No obstante, si bien existe mucha información sobre la estructura, localización y expresión de los canales de agua, es muy poco lo que se conoce sobre su real importancia fisiológica. Recientemente, se propuso un mecanismo alternativo para explicar el transporte transcelular de agua el cual consistiría en un acoplamiento directo del flujo de agua al movimiento de solutos a través de transportadores específicos de membrana como ser el transportador Na+/glucosa. El objetivo de este trabajo fue caracterizar la permeabilidad hídrica, en una nueva línea celular derivada de túbulo colector cortical de rata (RCCD,). Estas células exhiben una elevada resistencia transepitelial asociada a una importante diferencia de potencial y corriente de corto cicuito. Previamente demostramos que la linea celular RCCDi posee una secreción de fluido espontanea y mantenida a lo largo del tiempo en ausencia de todo tipo de gradiente (químico u osmótico) y aún en contra de un D P. Esta secreción ocurre sin que exista expresión de las AQPs hasta el presente descriptas en los túbulos colectores nativos. El paso siguiente fue evaluar las características del flujo de volumen basal, así como de la permeabilidad al agua luego de la exposición a un rango de D P y D P . La medida del flujo neto de agua transepitelial (Jw, ul.min-1.cm-2) se realizó, minuto a minuto, en células cultivadas durante 5 a 7 días, sobre soportes permeables. Los resultados muestran que el Jw basal (-0.116 ± 0.009, n=32) ftie dependiente de la temperatura e independiente de la presencia de Na+. El agregado de ouabaina (10-4 M) o CNK (8.3 10-3 M) inhibió significativamente el Jw, lo que indicaría que el mismo estaría asociado al transporte activo de iones. Se realizaron experimentos variando el D P, obteniéndose un Jw que fue función lineal del gradiente aplicado, siendo el coeficiente de permeabilidad hidrostática (Phydr, cm/s) de 1.053 ±0.126 (11=4). El Phydr fue independiente del transporte de Na+ y no estaría asociado al transporte activo de iones ya que no se modificó por la presencia de ouabaina o de CNK. Se realizaron experimentos variando el D P , aumentando la osmolaridad en el compartimiento seroso, siendo el Jw función lineal del gradiente aplicado. El coeficiente de permeabilidad osmótico (Posm x 10-3, cm/s) fue de 4.71 ±0.41 (n=ó) e inhibido por la ausencia de Na+ en un 56 %. El Posm fue también inhibido por ouábaina en un 77% y por CNK en un 35%, lo que indicaría su dependencia con un transporte activo de iones. Cuando la osmolaridad se incrementó en el compartimiento mucoso se obtuvo un Posm significativamente menor que en el caso anterior (2.30 ± 0.09, t=3, p< 0.001). Este valor de Posm fue inhibido en un 30% por ouabaina. Dado que nuestros resultados muestran que el Posm es dependiente del transporte activo de iones mientras que el Phydr no lo es, y que generalmente se acepta que un AP induce un pasaje de agua por la vía paracelular, sugerimos que predominantemente el flujo de agua inducido por un An sería transcelular. Además, la diferencia entre los valores de Posm obtenidos con D P generados mediante una hiperosmolaridad mucosa y serosa indicaría una posible asimetría entre la permeabilidades de las caras serosa y mucosa del epitelio.