REGULACIÓN DEL INTERCAMBIADOR Cl-/HCO3- POR LA AVP EN CÉLULAS DE COLECTOR CORTICAL.

RIVAROLA VALERIA; FORD PAULA; CHARA OSVALDO; PARISI MARIO; CAPURRO CLAUDIA

Buenos Aires, Argentina

Congreso; Reunión Anual de la SAB; 2002

Sociedad Argentina de Biofísica (SAB)

REGULACIÓN DEL INTERCAMBIADOR Cl-/HCO3- POR LA AVP EN CÉLULAS DE COLECTOR CORTICAL. Valeria Rivarola, Paula Ford, Osvaldo Chara, Mario Parisi y Claudia Capurro. Laboratorio de Biomembranas. Departamento de Fisiología y Biofísica. Facultad de Medicina. Universidad de Buenos Aires. Argentina. mariv@fmed.uba.ar. Los túbulos colectores del riñón de mamífero juegan un papel central en la regulación del transporte de agua-solutos y en el mantenimiento del equilibrio ácido-base. Esta heterogeneidad funcional se corresponde con una heterogeneidad estructural (células principales y células intercalares). Las células principales (CP) son las encargadas de la reabsorción de sodio y agua, bajo la acción de la hormona arginina-vasopresina (AVP). En cuanto a las células intercalares (CI) existen al menos dos tipos, a y b, ambas responsables del mantenimiento del equilibrio ácido-base. Sin embargo, los mecanismos implicados en estos procesos y la plasticidad de las CI no son aún claramente entendidos. Uno de los transportadores involucrados en el control del pH intracelular (pHi) es el intercambiador Cl-/HCO3- relacionado con la banda 3 eritrocitaria (AE). Existen 4 isoformas de este transportador clonadas hasta el momento en rata: AE1-4, cuya ubicación subcelular es controvertida. El objetivo de este trabajo fue caracterizar la participación del intercambiador Cl-/HCO3- (AE) en el mantenimiento del pHi y su posible regulación por la AVP en la línea celular RCCD1 (modelo de túbulo colector formado por CP y CI). Los estudios de RT-PCR mostraron la expresión de las isoformas AE2 y AE4. El pHi se monitoreó utilizando el fluorósforo BCECF sobre monocapas de células RCCD1 cultivadas sobre soportes permeables. La remoción bilateral del Cl- indujo una alcalinización reversible. La magnitud de esta respuesta permitió separar a las células en 2 poblaciones: P1 (DpHi = 0,36 ± 0,03; 56%) y P2 (DpHi = 0,14 ± 0,02; 44%). Al remover el Cl- del lado apical las células P1 se alcalinizaron (DpHi = 0,17 ± 0,03; p<0,01, n=6) y las P2 se acidificaron (DpHi = -0,04 ± 0,01; p<0,01, n=8). Por otra parte, la remoción del Cl- del lado basolateral produjo una alcalinización similar en ambas poblaciones. Estos resultados indicarían que la población P1 expresaría intercambiadores Cl-/HCO3- tanto en la membrana apical como en la basolateral. En cambio la población P2 solo expresaría una isoforma del intercambiador Cl-/HCO3- en la membrana basolateral. La AVP indujo una alcalinización (DpHi = 0,10 ± 0,01; p<0,001, n=32) transitoria y sensible a EIPA, compatible con una activación primaria de un intercambiador Na+/H+. La recuperación fue dependiente de la presencia de Cl- y HCO3- sugiriendo la activación de un intercambiador Cl-/HCO3-. Además los estudios de remoción de Cl- mostraron que la AVP activó alguna isoforma del intercambiador Cl-/HCO3- presente en la población P1 pero no en P2. Al realizar estos estudios con un protocolo que solo carga las CI de RCCD1 se observó que la hormona activó una isoforma del intercambiador Cl-/HCO3 presente en estas células. Estos resultados sugieren que las células RCCD1 expresan una isoforma apical y una basolateral del intercambiador Cl-/HCO3- Proponemos que AE2 se expresaría en la membrana basolateral y AE4 en la apical. Además demostramos por primera vez que la AVP activaría el o los intercambiadores Cl-/HCO3- de las CI del túbulo colector.