Actividad antimicrobiana de Quitosano: Efecto sobre la internalización de Staphylococcus Aureus en células epiteliales de la glándula mamaria bovina.

FELIPE, VERÓNICAL; MORGANTE CAROLINA; ICELY PAULA A; CORREA, SILVIA G; PORPORATTO CARINA

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

La Mastitis bovina causada por Staphylococcus aureus es una de las infecciones mas importantes del ganado, y afecta tanto a la calidad como la cantidad de la producción lechera. Esta bacteria tiene la habilidad de evadir la respuesta inflamatoria generando una supresión de la respuesta inmune mediada por diferentes mecanismos. Las células epiteliales de la glándula mamaria (GM) bovina actúan como primera línea de defensa frente a una infección y contribuyen a la respuesta inflamatoria de la ubre mediante la secreción de factores quimiotácticos para células inmunes. El bloqueo de la adhesión bacteriana a las células epiteliales y colonización de las superficies mucosas en la infección por S. aureus podría ser una estrategia efectiva para prevenir la infección. Quitosano (Q) es un polisacárido de acetil-glucosamina deacetilada obtenido de la Quitina y uno de los polímeros más abundantes en la naturaleza. Presenta efectos antibacterianos, propiedades mucoadhesivas naturales y capacidad de modular la respuesta inmunológica. Dada las propiedades de Q, en el presente trabajo se evaluó la actividad antimicrobiana del polisacárido y la capacidad de controlar la adherencia de S aureus a células epiteliales de GM bovina. En el presente estudio se utilizó la cepa S. auerus V329. Se observó una disminución de la DO y recuento de UFC/ml en forma dosis dependiente en presencia de concentraciones crecientes de Q, en cultivos de medio TSB crecidos durante 16h a 37ºC. Conjuntamente, V329 mostró un retraso en la fase de latencia y exponencial de crecimiento en presencia de 100 y 400 ug/ml de Q. Se evaluó la capacidad de modificar la adherencia e internalización de la cepa V329 a las células epiteliales de GM, utilizando la línea celular de epitelio de GM bovina MAC-T. La capacidad de adherencia de V329 a las MAC-T se encontró disminuida en presencia del polisacárido Q en forma dosis dependiente evaluado mediante recuento de las UFC (p<0,05). Se realizaron cultivos celulares de MAC-T con distintas concentraciones de Q (0.01 a 100 ug/ml) por 24 hs. Luego, las MAC-T fueron lavadas e incubadas con V329-FITC por 1 h. Se evaluó por citometría de flujo la internalización de V239 en estas células. Se observó una disminución del porcentaje de bacterias internalizadas al aumentar la dosis del pre tratamiento con Q. Se evaluó el efecto de Q sobre la respuesta inmune generada por las células epiteliales de GM luego de la infección con V329, determinando la producción de citoquinas y quimioquinas. Por RT-PCR se determinó un incremento en la expresión de mARN de TNF-a, IL-8 y CCL-2 en células MAC-T estimuladas con Q + V329 (p<0,05). El polisacárido Q presenta actividad bacteriostática en las primeras fases del crecimiento de cepas de S. aureus, e inhibe la internalización y adherencia en cultivos de células epiteliales mamarias. Además este polisacárido estimula una respuesta inflamatoria por parte del epitelio de la GM, lo cual podría favorecer la eliminación del patógeno.