Inhibición de la formación de biofilm por Quitosano en cepas de Staphylococcus aureus aislados de mastitis bovina

FELIPE, VERÓNICA; MORGANTE CAROLINA; PORPORATTO CARINA

Villa María

Jornada; VI Jornadas de Investigación UNVM; 2011

Staphylococcus aureus es uno de los principales patógenos aislado en mastitis bovina, y su habilidad para formar biofilms es considerado un factor de riesgo para infecciones persistentes. Quitosano (Q) es un polisacárido de acetil-glucosamina deacetilada obtenido de la Quitina, el segundo polímero más abundante en la naturaleza. Este biomaterial presenta actividad antimicrobiana e inhibe la formación de biofilm sobre dispositivos médicos. Los objetivos del presente trabajo fueron evaluar la formación de biofilm por aislamientos bovinos de S. aureus, y estudiar la actividad antimicrobiana de Q, como así también la capacidad de controlar la formación de biofilm. Se tomaron muestras en 15 tambos seleccionando al azar el 20% de los animales, y analizadas por técnicas microbiológicas convencionales. Se identificaron como S. aureus mediante la amplificación por PCR de la secuencia DNAr 16S. Se obtuvieron 9 aislamientos de S. aureus y se determinó: la producción de biofilm mediante la técnica de rojo congo (CRA) (ensayo cualitativo), y cultivo en placas poliestireno (TCP) y coloración con cristal violeta (CV) (ensayo cuantitativo). Se observó que 7 de 9 cepas aisladas presentan fenotipo formador de biofilm mediante CRA, las cuales mediante el método de TCP se clasificaron en fuertes (3:9) y débiles (6:9) formadoras de biofilm. El efecto de Q fue evaluado utilizando la cepa V329 de S. aureus, una cepa salvaje aislada de mastitis bovina fuertemente productora de biofilm. Se realizaron cultivos de V329 por 16h en presencia de 100-800 ug/ml de Q. Comparado con los cultivos sin Q, la tasa de crecimiento fue del 31.7% para 100 ug/ml al 8.5% para 800 ug/ml (p<0.05). La formación de biofilm disminuyó en forma dosis dependiente en cultivos de V329 en CRA suplementado con Q (100-800 ug/ml). Se observó una inhibición de la formación de biofilm del 3.2% (100ug/ml) al 42.8% (800ug/ml) en cultivos de V329 con 100-800 ug/ml de Q en TCP luego de 24 hs de incubación y tinción con CV (p<0.05). Mediante la técnica de MTT se determinó pérdida en la viabilidad de las bacterias crecidas en el biofilm del 7.2% (100ug/ml) al 71.9% (800ug/ml) (p<0.05). Estos resultados muestran la habilidad de las cepas de S. aureus aisladas de bovinos para producir biofilm, lo cual podría asociarse a infecciones persistentes. Además, Q presenta actividad bacteriostática, inhibiendo la formación de biofilm y reduciendo la viabilidad de los mismos. El efecto del polisacárido podría contribuir a la eliminación del patógeno en la glándula mamaria bovina, y actuar como un nuevo agente para terapias alternativas requeridas en el control de la infección.