Characterization and partial purification of Mg-dechelatase activity from strawberry fruit

COSTA LORENZA; MARTÍNEZ GUSTAVO; CIVELLO PEDRO; CHAVES ALICIA

Carlos Paz, Córdoba

Congreso; XXXVII Reunión Anual de la sociedad Argentina de investigaciones en bioquímica y biología molecular; 2001

SAIB

Se preparó un extracto para caracterizar la actividad Mg-dequelatasa (enzima que libera Mg+2 de clorofilas y clorofílidos) en condiciones de alta y baja fuerza iónica. (enzima que libera Mg+2 de clorofilas y clorofílidos). Se encontró que la actividad Mg-dequelatasa en condiciones de alta fuerza iónica tiene el comportamiento típico de una actividad enzimática, no es capaz de atravesar  filtros de 10 kD, y pierde su actividad luego de calentar a 100º C 10 min. Sin embargo en condiciones de baja fuerza iónica es capaz de atravesar filtros de corte 10 kD, es termoresistente (conservó su actividad luego de calentar a 100º C durante 10 min) pero presenta menor afinidad por el sustrato. Se analizó el efecto de varios compuestos sobre la actividad y se encontró que EDTA aumenta la actividad enzimática mientras que el Ca+2 y Mg+2 la inhiben. La presencia de Hg+2 fuertemente inhibe la actividad de la enzima lo que sugiere la presencia de grupos sulfhidrilos en el sitio activo, el tratamiento con proteinasa K reduce significativamente la actividad enzimática, lo que revela la naturaleza peptídico de Mg-dequelatasa. Se realizó una purificación parcial de la actividad Mg-dequelatasa  y se determinó la masa molecular por cromatografía de exclusión molecular.